[发明专利]一种纳米酶和糖胺聚糖复合纳米纤维敷料的制备方法

权利要求书

1.一种纳米酶和糖胺聚糖复合纳米纤维敷料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）敷料基底的制备：将聚合物溶于溶剂A中，将所得聚合物纺丝液通过静电纺丝制备得到纳米纤维膜；

（2）复合纳米纤维膜的制备：将纳米酶均匀分散于可溶胀或微溶所述聚合物的溶剂B中，通过静电喷涂将纳米酶稳定负载于步骤（1）所得纳米纤维膜表面；所述纳米酶为普鲁士蓝纳米粒子，纳米酶的浓度为4~6 mg /mL；

（3）活性物制备：将糖胺聚糖与盐酸多巴胺在酸性缓冲液中经酰胺反应合成含多巴胺的接枝偶联物，在酸性透析液中进行透析，经过冷冻干燥得到活性物；所述糖胺聚糖为肝素钠、硫酸软骨素和硫酸化透明质酸的一种或多种；

（4）复合纳米纤维敷料的制备：将步骤（2）所得复合纳米纤维膜置于步骤（3）所得活性物的碱性缓冲液中进行振荡处理，清洗、干燥后得到复合纳米纤维敷料；所述活性物与复合纳米纤维膜的质量比为1:5~1:10。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中：

所述聚合物为聚己内酯、聚乳酸和聚乳酸-羟基乙酸共聚物的一种或多种；所述溶剂A为三氟乙醇。

3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中：

所述聚合物纺丝液的质量分数为10~15%；

所述静电纺丝的参数为：纺丝速度0.35~0.45 mm/s，针头20~22G，距离15~18cm，电压12~15kv，温度25~35℃，湿度30~50%。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中：

所述溶剂B为乙醇和/或二甲基亚砜。

5.如权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中：

所述静电喷涂的参数为：电喷速率为0.0006-0.0015 mm /s，针头24-27G，距离5~8cm，电压19~22kv，温度为28~33°C，湿度为38~45%。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（3）中：

所述糖胺聚糖与盐酸多巴胺的质量比为3:1~5:1；

所述酸性缓冲液为pH为5.0~5.5的酸性二吗啉乙磺酸缓冲液；

酰胺反应时间为20~30h，酸性透析液的pH为5~5.5，透析时间为48~72h。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤（3）中：

所述糖胺聚糖在于盐酸多巴胺反应前预先经过羧基活化剂的活化处理；所述羧基活化剂为摩尔比为1.5-2.5:1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，活化处理条件为：在pH=5-6的二吗啉乙磺酸缓冲液中、惰性气体氛围下20-30°C下活化处理。

8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（4）中：

所述碱性缓冲液为pH为8.0~8.5的三羟甲基氨基甲烷缓冲液；

振荡温度30~40°C，振荡时间为36~60h。

9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（4）中：

所得复合纳米纤维敷料中纳米酶的含量为0.12~0.2 mg/cm²；

所得复合纳米纤维敷料中糖胺聚糖的含量为0.4~0.7 mg/cm²。