[发明专利]糖化白蛋白校准品或质控品的制备方法

说明书

本发明属于体外诊断试剂技术领域，为克服糖化白蛋白校准品、质控品生产过程繁杂，成本高，液体形态产品测值容易变化的缺点，提供糖化白蛋白校准品或质控品的制备方法，包括以下步骤：以人重组白蛋白或者血清为原料，进行糖基化；加入糖基化反应抑制剂或终止剂，抑制剂或终止剂选自金属螯合剂、硫辛酸或肌肽中的一种或几种，金属螯合剂浓度0.1‑3g/L,硫辛酸浓度0.1‑1g/L，肌肽浓度0.05‑1g/L；加入不冻液，不冻液与糖基化反应液之间的体积比为1:3‑1:1，不冻液为1,2‑丙二醇和/或1,3‑丙二醇；将制得的糖化白蛋白校准品或质控品在‑20℃以下保存。该方法生产工艺简单，成本低，试剂的稳定性好，使用方便。

技术领域

本发明属于体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种糖化白蛋白校准品或质控品的制备方法。

背景技术

人体中的葡萄糖与血清蛋白的N-末端发生非酶促的糖基化反应,其中90％与血清蛋白链内第189位赖氨酸结合,形成高分子的酮胺结构,总称为糖化血清蛋白，其中90％以上为糖化血清白蛋白，因此糖化血清白蛋白(Glycated Albumin，GA)可以反映糖化血清蛋白的总体水平。糖化白蛋白是反映过去2-3周平均血糖水平的一项指标，比血糖检测“金标准”糖化血红蛋白的反映周期要短一些。因此，GA在治疗效果的确认以及临床用药量的调整方面比糖化血红蛋白具有优势。

但是传统的糖化白蛋白校准品的制备过程，一般都是经过糖基化后，进行过滤或透析，以除去未反应的葡萄糖，避免进一步糖基化带来测值的改变，而且透析后，都是做成冻干粉的形式，工艺繁杂，不利于量产。例如专利CN105092336A采用血清为原料，经过离心、糖基化、透析纯化然后冷冻干燥，得到成品；CN1103076213A采用人重组白蛋白为原料，经过糖基化、透析纯化，然后冷冻干燥，得到成品；CN104764638A，同样采用人重组白蛋白为原料，进行糖基化，提纯过程采用了切向流过滤技术，上述专利再做成成品前，都需要经过纯化的步骤，目的是除去未反应的葡萄糖和小分子糖化多肽，避免糖基化反应的持续进行改变试剂测值。而且最后都是做成冻干粉的形式，工艺流程比较复杂。鉴于校准品、质控品制备糖基化过程受干扰因素较多，液体形态产品测值容易发生变化，因此目前尚未见液态糖化白蛋白校准品、质控品相关报道。

发明内容

本发明旨在克服上述冻干粉形态的糖化白蛋白校准品、质控品生产过程中的流程繁杂,液体形态产品测值容易变化的的缺点，提供一种糖化白蛋白校准品或质控品的制备方法，通过在糖基化的反应液中添加糖基化反应抑制剂和终止剂，来提供一种糖基化后无需纯化和冻干的液态糖化白蛋白校准品和质控品，生产工艺大大简化，试剂的稳定性好，使用方便。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种糖化白蛋白校准品或质控品的制备方法，包括以下步骤：

(1)以人重组白蛋白或者血清为原料，进行糖基化，糖基化程度依据校准品或质控品的浓度而定；

(2)加入糖基化反应抑制剂或终止剂，从而使已经糖基化的蛋白质维持在一定浓度，所述抑制剂或终止剂选自金属螯合剂、硫辛酸或肌肽中的一种或几种，所述金属螯合剂终浓度0.1-3g/L,硫辛酸终浓度0.1-1g/L，肌肽终浓度0.05-1g/L；

(3)加入不冻液，不冻液与糖基化反应液之间的体积比为1:3-1:1，所述不冻液为1,2-丙二醇或1,3-丙二醇或者其组合；

(4)将制得的糖化白蛋白校准品或质控品在-20℃以下保存。

进一步的，所述步骤(2)金属螯合剂终浓度0.5g/L，硫酸锌终浓度0.35g/L，肌肽终浓度0.75g/L。

进一步的，所述步骤(2)金属螯合剂为次氮基三乙酸。

进一步的，还包括步骤(4)将糖化白蛋白校准品或质控品在-20℃到-30℃范围内保存。

进一步的，所述步骤(4)保存时间最长为12个月。