[发明专利]一种米槁组织培养方法

说明书

本发明公开了一种米槁(Cinnamomum migao H.W.Li)组织培养方法，属木本植物无性繁殖技术领域，具体包括消毒方式、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽，选取当年生性状优良的米槁半木质化枝条，修剪成带腋芽的茎段，经消毒接种到诱导培养基中，获得无菌外植体，在光照条件培养下形成愈伤组织和不定芽，再将其接种到增殖培养基中诱导扩繁，后转接至生根培养基中生根，炼苗移栽。本发明取材方便，减少育苗时间，能解决米槁资源短缺的现状，为工厂化生产提供理论支持。

技术领域

本发明属于木本植物无性繁殖技术领域，具体涉及一种米槁的组织培养方法。

技术背景

米槁(Cinnamomum migao H.W.Li)，系樟科樟属的常绿高大乔木。在中国高等植物红色物种名录中被收录为近危(NT)种，主要分布于我国贵州、广西、云南三省交界处。其果实大果木姜子是治疗胃肠道疾病和心脑血管疾病方面的良药，具有显著的疗效，市场上对于米槁果实的需求量大。但米槁种子发芽率低，且米槁现存的米槁资源中，多为成年树种，幼树数量少，不利于种群的繁衍，加之人们对米槁的不合理开发利用，导致米槁资源稀缺市场供不应求。因此，米槁的繁殖研究是当前急需解决的问题。

现有的米槁繁殖技术主要是种子繁殖与扦插技术的研究，但并未记载对米槁组织培养的技术研究。

发明内容

本发明目的在于解决背景技术中发芽率低、受环境影响大的问题，研究了一种米槁的组织培养方法，以此提高米槁的繁殖速度与系数，减少米槁繁殖受季节、环境的影响。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种米槁组织培养方法，包括消毒方式、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽，具体方法步骤如下：

a.取当年生米槁半木质化枝条，修剪成2-3cm带有腋芽的茎段为外植体，置于洗洁精水中浸泡，用牙刷刷洗，流水冲洗；

b.在超净工作台中，将处理好的外植体浸泡于75％的酒精中30s，再用0.1％的HgCl₂消毒6min30s-9min，最后用无菌水冲洗3-5次，获得无菌外植体，在无菌培养皿上切除两段变黑部分，备用；

c.将处理好的外植体接种到诱导培养基MS+6-BA1.0-3.0mg/L+IBA0.1-0.3mg/L+琼脂6.5g/L+蔗糖30g/L中，培养基pH值调到5.8，培养条件为光培养，培养30d后获得无菌的愈伤组织和不定芽；

d.将无菌不定芽转接到增殖培养基MS+6-BA0.1-3.0mg/L+IBA0.1-0.3mg/L+NAA0.2-0.4mg/L+活性炭0.5-3g/L+琼脂6.5g/L+蔗糖30g/L，pH值调到5.8，培养条件为光培养，培养30d，获得米槁增殖组培苗；

e.选择经增殖培养后长势良好、高2.5cm以上的不定芽转接种生根培养基1/2MS+IBA0.1-3.0mg/L+NAA0.1-1.0mg/L+活性炭0-0.5g/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L上，培养基pH值为5.8，培养条件为光培养。

f.选择生根2-3条、叶片5～7片的组培苗进行炼苗处理，在闭瓶条件下，接受室温和自然光3-5d，再打开瓶盖炼苗5d，使其逐步适应外部生长环境；炼苗后，用镊子取出米槁组培苗，在自来水下将基部琼脂冲洗干净之后进行移栽，移栽基质选用沙子+珍珠岩、或泥炭土+珍珠岩、或泥炭土+沙子三种基质处理。

所述步骤a，于中午11:00-13：00选取，并流水冲洗时间为2h。

所述步骤b中消毒时间为6min30s。

所述步骤c、d、e中的诱导培养、增殖培养、生根培养的培养条件均为光培养，光照时间12h/d、光照强度100％、培养温度25±2℃。