[发明专利]一种米槁组织培养方法

权利要求书

1.一种米槁组织培养方法，其特征在于：包括步骤如下:

a.取当年生米槁半木质化枝条，修剪成2-3cm带有腋芽的茎段为外植体，置于洗洁精水中浸泡，用牙刷刷洗，流水冲洗；

b.在超净工作台中，将处理好的外植体浸泡于75％的酒精中30s，再用0.1％的HgCl₂消毒6min30s-9min，最后用无菌水冲洗3-5次，获得无菌外植体，在无菌培养皿上切除两段变黑部分，备用；

c.将处理好的外植体接种到诱导培养基MS+6-BA1.0-3.0mg/L+IBA0.1-0.3mg/L+琼脂6.5g/L+蔗糖30g/L中，培养基pH值调到5.8，培养条件为光培养，培养30d后获得无菌的愈伤组织和不定芽；

d.将无菌不定芽转接到增殖培养基MS+6-BA0.1-3.0mg/L+IBA0.1-0.3mg/L+NAA 0.2-0.4mg/L+活性炭0.5-3g/L+琼脂6.5g/L+蔗糖30g/L，pH值调到5.8，培养条件为光培养，培养30d，获得米槁增殖组培苗；

e.选择经增殖培养后长势良好、高2.5cm以上的不定芽转接种生根培养基1/2MS+IBA0.1-3.0mg/L+NAA0.1-1.0mg/L+活性炭0-0.5g/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L上，培养基pH值为5.8，培养条件为光培养。

f.选择生根2-3条、叶片5～7片的组培苗进行炼苗处理，在闭瓶条件下，接受室温和自然光3-5d，再打开瓶盖炼苗5d，使其逐步适应外部生长环境；炼苗后，用镊子取出米槁组培苗，在自来水下将基部琼脂冲洗干净之后进行移栽，移栽基质选用沙子+珍珠岩、或泥炭土+珍珠岩、或泥炭土+沙子三种基质处理。

2.如权利要求1所述的一种米槁组织培养方法，其特征在于：步骤a,于中午11:00-13：00选取，并流水冲洗时间为2h。

3.如权利要求1所述的一种米槁组织培养方法，其特征在于：所述步骤b中消毒时间为6min30s。

4.如权利要求所述的一种米槁的组织培养方法，其特征在于所述步骤c、d、e中的诱导培养、增殖培养、生根培养的培养条件均为光培养，光照时间12h/d、光照强度100％、培养温度25±2℃。

5.如权利要求1所述的一种米槁组织培养方法，其特征在于：步骤f，选择阴天移植，避免在光照强的上午10点至下午3点与大风天移栽组培苗。

6.如权利要求所述的一种米槁的组织培养方法，其特征在于：所述步骤f中最佳生长基质为：沙子+珍珠岩。