[发明专利]一种提高烟草抗病性的转基因方法、重组表达载体及应用

说明书

一种提高烟草抗病性的转基因方法、重组表达载体及应用，属于基因工程领域，所述转基因方法是通过构建同时包含AtPR1和FAD2基因的双基因重组表达载体，然后利用根癌农杆菌将所述双基因重组表达载体转入到烟草植株组织中并稳定遗传，获得转基因阳性烟草植株，所述的转基因阳性烟草在受到病原菌浸染时表现出明显的抗性，能显著提高烟草黑胫病抗性。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种提高烟草抗病性的转基因方法、重组表达载体及应用。

背景技术

烟草是我国主要的经济作物之一，南北各省区广为栽培，烟草在种植过程中，极易出现病虫害，且防治较难。烟草病害不仅影响烟草的产量和品质，而且降低烟草的经济价值，严重威胁着烟草产业的发展。

烟草病害主要有苗期病害和大田期病害，苗期主要病害有烟草炭疽病和猝倒病，漂浮育苗中偶有烟草黑胫病发生。大田期病害主要有烟草青枯病、烟草黑胫病、普通花叶病等，偶有赤星病、白粉病危害。烟草黑胫病是发生在烟草上常见的土传病害，病害的发生由于真菌感染引起，主要危害成株的茎基部和根部，也侵染叶片和茎中，起初可表现出近土表的茎基部出现黑色或暗褐色病斑，之后沿着植株扩展到茎叶，引起猝倒。在成株期发现病害，可见病害上青下黄，叶片枯萎凋零悬挂在茎上，直至植株全部枯萎死亡。

PRs是病程相关蛋白，一般分有17个家族，其中PR1基因认为与植物抗病防御密切相关，已有研究表明，PR1基因表达与水杨酸的积累密切相关，其可以抵抗许多植物的病原菌。FAD2基因是油酸去饱和酶的编码基因，是控制油酸向亚油酸转化的关键基因，其编码的酶位于内质网，在亚油酸合成过程中向位于内质网的单不饱和脂肪酸引入第二个双键，是多不饱和脂肪酸合成的第一步也是关键的一步，直接决定种子中储存脂中多不饱和脂肪酸的含量与比例。

发明内容

为提高烟草抗病性，本发明的目的一在于提供一种提高烟草抗病性的转基因方法，该方法运用基因工程技术手段，扩增出AtPR1和FAD2基因，构建双基因表达载体并使其能够在烟草植株中有效表达，提高烟草抗病性。本发明的目的二在于提供一种包含AtPR1和FAD2基因的重组表达载体，目的三在于提供包含上述重组表达载体的转化体，目的四在于提供上述重组表达载体在提高烟草抗病性方面的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种提高烟草抗病性的转基因方法，首先是通过构建同时包含AtPR1和FAD2基因的双基因重组表达载体，然后利用根癌农杆菌将所述双基因重组表达载体转入到烟草植株组织中表达并稳定遗传；所述AtPR1的核苷酸序列如SEQ ID：01所示，所述FAD2的核苷酸序列如SEQ ID：02所示。

本发明还请求保护一种提高烟草抗病性的重组表达载体，所述重组表达载体中含有AtPR1和FAD2基因。

本发明另外请求保护包含所述重组表达载体的转化体。

本发明此外请求保护所述重组表达载体在提高烟草抗病性方面的应用。

有益效果：