[发明专利]一种前列腺癌分子靶向系统及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种前列腺癌分子靶向系统及其构建方法和应用。其包括靶向外泌体以及其负载的活性成分，靶向外泌体为能特异性识别PSMA靶标的靶向外泌体，活性成分为能够抑制前列腺增殖、扩增、迁移和/或侵袭的成分；或为降低其激素抵抗性的成分。本发明构建了一种能够特异性靶向前列腺癌的外泌体，并在其上加载了能够针对影响前列腺癌激素抵抗进程的siRNA，阻断并扭转前列腺癌从激素依赖向非依赖发展的谱系过程，使肿瘤能重获雄激素的敏感性、延长激素治疗有效时间。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种前列腺癌分子靶向系统及其构建方法和应用。

背景技术

前列腺癌是男性生殖系统常见的恶性肿瘤，其发病率和病死率近年来逐年提高，并渐趋年轻化。前列腺癌目前病因未明，最大特点是其有雄激素依赖性。对于早期局限性前列腺癌，常规手术或抗雄治疗疗效确切，但是晚期不可避免发展成激素非依赖甚至去势抵抗型前列腺癌(CRPC)。CRPC是前列腺癌的最终结局和治疗的重点及难点，迫切寻找新的有效治疗方法来解决耐药的问题。

最近研究提示谱系可塑性是造成CRPC耐药的关键。文献报道，表观遗传分子EZH2在前列腺癌激素依赖向非依赖转变过程中起重要作用，是影响其谱系可塑性的关键分子，直接关系到CRPC的耐药抵抗。众所周知，前列腺癌激素依赖的特点和雄激素受体(AR)密切相关，而抑制EZH2可以恢复AR表达和机体对抗雄治疗的敏感性。用药物来高效抑制EZH2这一特殊的功能，有可能成为治疗和扭转CRPC耐药的一种有效新策略。

而目前临床可供选择的EZH2小分子抑制剂虽然效果得到证实，却都不具有选择性或选择性低，影响其效果的发挥，迫切需要寻找更精准的治疗药物。RNAi作为肿瘤治疗新技术前景广阔，虽然可以进行精准治疗，确存在效应分子靶向性差、转运效率低和靶点选择等瓶颈。外泌体是细胞分泌的天然小囊泡，是细胞间通讯的重要媒介，能携带和在细胞间传递多种物质。研究证明它能够将药物或小分子核酸从供体细胞转移到受体细胞，从而引发后者表型的改变，利用外泌体来向体内递送siRNA能提高RNA输送效率并且比其他人工载体更加低毒副作用和低免疫反应，但是需要解决靶向性不足的缺点。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种前列腺癌分子靶向系统及其构建方法和应用，本发明构建了一种能够特异性靶向前列腺癌的外泌体，并在其上加载了能够针对影响前列腺癌激素抵抗进程的siRNA，阻断并扭转前列腺癌从激素依赖向非依赖发展的谱系过程，使肿瘤能重获雄激素的敏感性、延长激素治疗有效时间。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种前列腺癌分子靶向系统，包括靶向外泌体以及其负载的活性成分。

进一步地，靶向外泌体为能特异性识别PSMA靶标的靶向外泌体。

进一步地，靶向外泌体的构建过程为：

将PSMA单链抗体与外泌体膜上的蛋白Lamp2b融合，构建得到PSMA-Lamp2b质粒，然后慢病毒包装后感染细胞，使之分泌产生能特异性识别PSMA靶标的的靶向外泌体。

进一步地，活性成分为能够抑制前列腺增殖、扩增、迁移和/或侵袭的成分；或为降低其激素抵抗性的成分。

进一步地，活性成分为siRNA，其核苷酸序列如下：

5’-AAGAGGTTCAGACGAGCTGAT-3’(SEQ ID NO.1)

或5’-AAGACTCTG AATGCAGTTGCT-3’(SEQ ID NO.2)所示。

一种上述前列腺癌分子靶向治疗系统的构建方法，包括以下步骤：

(1)构建能特异性识别前列腺癌中靶基因的靶向外泌体；

(2)设计具有抗肿瘤效果的siRNA，然后将其加载至靶向外泌体上即可。