[发明专利]制备干细胞凝胶的方法

说明书

一种制备干细胞凝胶的方法，包括从脐血中获取脐血浆及白膜层，并首次离心，取离心后得到的沉淀物，并将沉淀物重悬，得到重悬液；将重悬液反复冷冻‑冻融3‑5次；最后在重力加速度3,500g～4,000g二次离心，取上清，即得干细胞提取物；按DMEM基础培养基体积的3％～5％加入干细胞提取物，制得用于形成凝胶的专用培养基，按每毫升专用培养基加入间充质干细胞，混匀后，于37℃，5.0％CO₂培养箱中培养至细胞汇合度为80％以上，即形成干细胞凝胶。本发明的方法，为间充质干细胞提供生长环境，起到“支架”的作用，便于将间充质干细胞施用于创面，并保留在创面，利于以间充质干细胞实施创面修复。

技术领域

本发明涉及一种生物凝胶，特别涉及一种以干细胞提取物为组分的凝胶，利于在组织修复中的应用。

背景技术

水凝胶是一类高度含水的具有三维网络交联结构的生物材料，在水中迅速溶胀并在此溶胀状态可以保持大量体积的水而不溶解。按其来源可分为天然和合成两大类。天然的亲水性高分子包括多糖类(淀粉、纤维素、海藻酸、透明质酸和壳聚糖等)和多肽类(胶原、聚L-赖氨酸和聚L-谷胺酸等)。合成的亲水高分子包括醇、丙烯酸及其衍生物类(聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚丙烯酰胺和聚N-聚代丙烯酰胺等)。由于其具有优异的生物相容性及一定的机械强度，可以高度拟合生物组织的微环境，因此广泛应用于组织工程和再生医学。

在全球范围内，干细胞临床试验已经超过1000项，其应用正在得到普及，但将这些干细胞应用于创面修复，仍需要合适的载体。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种制备干细胞凝胶的方法，为干细胞体外生长提供环境条件，利于作用于创面。

本发明的另一个目的在于提供一种制备干细胞凝胶的方法，将干细胞提取物制成凝胶形式利于作用于创面。

一种制备干细胞凝胶的方法，包括：

从脐血中获取脐血浆及白膜层，并首次离心，取离心后得到的沉淀物，并将沉淀物重悬，得到重悬液；

将重悬液反复冷冻-冻融3-5次；

最后在重力加速度3,500g～4,000g二次离心，离心时间30分钟～35分钟，取上清，即得干细胞提取物；

按DMEM基础培养基体积的3％～5％加入干细胞提取物，制得用于形成凝胶的专用培养基，按每毫升专用培养基加入5×10⁴～1×10⁵个间充质干细胞，混匀后，于37℃，5.0％CO₂培养箱中培养至细胞汇合度为80％以上，即形成干细胞凝胶。

本发明的方法，首次离心的重力加速度设置4500g～5500g，加速设置为5档，减速设置为2档，离心的温度为20℃～22℃，时间为30分钟～35分钟。

本发明的方法，将重悬液置入-96℃～-80℃超低温冰箱中12小时～16小时冷冻。

本发明的方法，置入37℃～42℃水浴锅中2分钟～3分钟内冻融。

本发明的方法，将重悬液置入-96℃～-80℃超低温冰箱中12小时～16小时冷冻，再置入37℃～42℃水浴锅中2分钟～3分钟内冻融，如此重复冷冻-冻融3-5次；

本发明的方法，二次离心时间为30分钟～35分钟。

本发明的方法，按每毫升专用培养基加入5×10⁴～1×10⁵个间充质干细胞。

为了便于从脐血中取得脐血浆及白膜层，则在温度20℃～22℃，重力加速度300g～400g预离心，22分钟～25分钟。