[发明专利]高等植物ACS双酶活关键位点突变制备单酶活突变体及应用

权利要求书

1.高等植物ACS双酶活关键位点突变制备单酶活突变体，其特征在于，包括：

高等植物ACS蛋白保守域BOX2保守序列F-Q-D-Y-H-G-[LM]-[PSKL]中的Q位点；在拟南芥ACS7蛋白中，该保守域中的Q位点位于其所有编码氨基酸的第98位，将ACS7蛋白中的该位点命名为Q98；将位于拟南芥第四号染色体13275200-13277188位置区间的ACS7基因组中第13275698-13275700位、其对应mRNA或cDNA序列中第399-401位的CAA碱基突变为GCA碱基，从而使ACS7蛋白的第98位氨基酸从Q突变成A，突变后的蛋白被命名为ACS7^Q98A；

高等植物ACS蛋白保守域BOX4保守序列T-N-P-S-N-P-L-G-[TA]-[TAMVIF]中的保守位点[TA]-[TAMVIF]；在拟南芥ACS7蛋白中，这两个保守位点分别对应其所有编码氨基酸中第221位的A和第222位的T，将拟南芥ACS7蛋白中这两个保守位点分别命名为A221和T222；将位于拟南芥第四号染色体13275200-13277188位置区间的ACS7基因组中第13276263-13276265位、第13276266-13276268位及其对应cDNA序列第768-770位、第771-773位的GCG碱基和ACG碱基分别突变为ACT和CTT，或者将其对应mRNA序列第768-770位、第771-773位的GCG碱基和ACG碱基分别突变为ACU和CUU，可以将ACS7蛋白的第221位和222位氨基酸由AT突变成TL，突变后的蛋白被命名为ACS7^A221TT222L；以及

高等植物ACS蛋白保守域ACS-motif 5保守序列D-F-x(3)-K-N-I-H-L-[IV]-S-D-E-I-[YF]-[SA]-G-[TS]-V-F中的第13个氨基酸D；在拟南芥ACS7蛋白中，该保守位点位于其所有编码氨基酸的第245位，将ACS7蛋白中的该位点命名为D245；将位于拟南芥第四号染色体13275200-13277188位置区间的拟南芥ACS7基因组中第13276335-13276337位或其对应cDNA序列中第840-842位的GAC碱基突变为AAT碱基，或者将其对应mRNA序列中第840-842位的GAC碱基突变为AAU碱基，可以使ACS7蛋白第245位氨基酸从D突变为N，突变后的蛋白被命名为ACS7^D245N。

2.根据权利要求1所述的高等植物ACS双酶活关键位点突变制备单酶活突变体，其特征在于，提供了：

一种拟南芥ACS7^Q98A C-S裂解酶单酶活性突变体，其氨基酸序列如SEQ NO.1所示；

一种拟南芥ACS7^A221TT222L C-S裂解酶单酶活性突变体，其氨基酸序列如SEQ NO.2所示；以及

一种拟南芥ACS7^D245N ACS单酶活性突变体，其氨基酸序列如SEQ NO.3所示。