[发明专利]一种含氨基酸复合液用于荔枝离体再生的产品及方法与应用

说明书

本发明公开了一种含氨基酸复合液用于荔枝离体再生的产品及方法与应用。本发明荔枝离体再生的方法，包括下述步骤：以荔枝花药为外植体，经愈伤组织诱导、增殖培养、体胚诱导培养、成熟培养萌发培养，得到再生荔枝植株；其中，增殖培养、体胚诱导培养分别采用含有氨基酸复合液AMO1的愈伤组织增殖培养基和含有氨基酸复合液AMO2的体胚诱导培养基。本发明提供荔枝离体再生的方法通过添加氨基酸复合液优化了愈伤组织增殖培养基和体胚诱导培养基的组分，特别是氨基酸种类及含量，从而优化体胚质量，提高愈伤组织增殖率、体胚诱导率，促进体胚萌发。

技术领域

本发明涉及一种含氨基酸复合液用于荔枝离体再生的产品及方法与应用，具体涉及一种含氨基酸复合液用于荔枝离体再生的产品，一种荔枝离体再生的方法和用于荔枝离体再生的产品的应用。

背景技术

荔枝(Litchi chinensis Sonn.)是我国重要的经济作物之一，在热区农业生产中占有重要地位。目前荔枝离体再生的方法主要是通过体胚发生途径获得再生植株，但荔枝体胚发生途径普遍存在体胚发生效率低、畸形胚诱导率高、萌发成苗难、基因型依赖等问题。因此，建立稳定高效的荔枝体胚再生途径仍是当前研究的热点之一。

氨基酸是构成蛋白质的基本单位，是生物体不可缺少的营养物质之一，与生命活动有着密切的关系。氨基酸可作为有机氮源，促进植物的生长，也可作为功能性物质对机体生命活动产生调节作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种含氨基酸复合液用于荔枝离体再生的产品及方法与应用。

本发明荔枝愈伤组织增殖及体胚发生过程中，不同种类氨基酸含量不同，通过添加含不同浓度外源氨基酸的复合液，改变培养基中的碳源，有效促进愈伤组织增殖、改善愈伤组织状态，提高体胚发生效率，为荔枝及其他木本植物离体再生研究提供理论依据和技术支持。

本发明提供的一种荔枝离体再生的方法，包括下述步骤：

1)以荔枝花药为外植体，在愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织诱导，得到胚性愈伤组织；

2)将所述胚性愈伤组织在含有氨基酸复合液AMO1的愈伤组织增殖培养基中进行增殖培养，得到增殖愈伤组织；

所述含有氨基酸复合液AMO1的愈伤组织增殖培养基包括愈伤组织增殖培养基和氨基酸复合液AMO1；

3)将步骤1)中所述胚性愈伤组织和/或步骤2)中所述增殖愈伤组织在含有氨基酸复合液AMO2的体胚诱导培养基中进行体胚诱导培养，得到体胚；

所述含有氨基酸复合液AMO2的体胚诱导培养基包括体胚诱导培养基和氨基酸复合液AMO2；

4)将所述体胚在成熟培养基中进行成熟培养，得到成熟体胚；

5)将所述成熟体胚在萌发培养基中进行萌发培养，得到再生荔枝植株。

上述的方法中，所述氨基酸复合液为含21种不同浓度的氨基酸，所述氨基酸为天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、γ-氨基丁酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和赖氨酸。

上述的方法中，所述含有氨基酸复合液AMO1的愈伤组织增殖培养基中氨基酸复合液AMO1的含量可为1～15ml/L，具体可为1、2、3、4、5、10、15ml/L。

上述的方法中，所述含有所述氨基酸复合液AMO2的体胚诱导培养基中氨基酸复合液AMO2的含量可为1～15ml/L，具体可为1、5、10、15ml/L。

上述的方法中，所述含有氨基酸复合液AMO1的愈伤组织增殖培养基中，所述氨基酸复合液AMO1由如下含量的氨基酸组成：

所述天冬氨酸的含量为4～65mg/L；