[发明专利]一种基于Au@Ag NPs滤纸基底对三种食源性致病菌检测方法

说明书

本发明公开了一种基于Au@Ag NPs滤纸基底对三种食源性致病菌检测方法，属于食品检测等技术领域。该方法如下：(1)通过种子介导的两步生长法制备Au NPs并利用其合成Au@Ag NPs溶胶。(2)通过浸涂法使其自组装在滤纸片上，制备基于滤纸的SERS基底。(3)将活化后的细菌菌液滴加到SERS基底上，进行SERS信号采集。(4)对采集的细菌SERS光谱进行归一化处理，并进行主成分分析。本发明利用滤纸基底良好的吸水性，增加细菌与SERS基底的接触，从而增强细菌的SERS信号。实现三种食源性致病菌的特异性、灵敏性检测，具有良好检测前景。

技术领域

本发明涉及食品安全检测技术领域，特别是涉及一种基于Au@Ag NPs滤纸基底对三种食源性致病菌检测方法技术领域。

背景技术

食源性致病菌可引起食物中毒，被极低浓度的传染性细菌污染的食物和水会导致许多严重甚至致命的疾病，它们利用食物作为食源性疾病的传播媒介。常见的食源性致病菌有金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、单核增生李斯特菌、鼠伤寒沙门氏菌等。食源性疾患的发病率居各类疾病总发病率的前列，是当前世界上最突出的卫生问题。

传统的微生物检测方法耗时费力，需要6～24小时的生长，并额外1～3天确认形态学和生化特征。作为替代方法，其他的检测方法如酶联免疫吸附法(ELISA)，聚合酶链反应(PCR)，多位点序列分型和液相色谱或气相色谱结合质谱已经发展为快速检测细菌。然而，所有现有的方法都有一个或多个缺点，包括需要笨重或昂贵的实验室仪器、复杂的程序和假阳性结果。因此，迫切需要开发快速、低成本、高灵敏度、能有效检测和鉴定病原菌的方法。该方法可用于控制食源性疾病，确保食品安全。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于Au@Ag NPs滤纸基底对三种食源性致病菌检测方法，以解决上述现有技术存在的问题，从而实现三种食源性致病菌检测的高特异性、灵敏性检测。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种三种食源性致病菌的检测方法，包括以下步骤：

步骤一，制备金纳米颗粒：

将100ml四氯金酸搅拌加热至沸腾，然后快速加入3ml柠檬酸钠溶液，待到溶液再次沸腾后继续搅拌加热30min，可得到红色透明的金纳米粒子溶胶；

步骤二，采用种子生产法制造金银核壳纳米粒子：

将步骤一得到的金纳米颗粒通过离心浓缩5倍后，取2ml浓缩的金纳米粒子和1ml柠檬酸钠加入烧瓶中在室温下搅拌5min。随后将烧瓶移至50℃水浴锅中，加入2ml抗坏血酸搅拌15min，在三种混合物搅拌的同时将0.8ml硝酸银溶液滴入混合物中，待其滴加完后继续搅拌30min，得到金银核壳纳米粒子溶胶；

步骤三，浸涂法制备金银核壳纳米粒子滤纸基底：

将圆形滤纸片浸泡在步骤二得到的金银核壳纳米粒子溶胶中，在不需要任何化学交联过程的情况下，范德瓦尔斯相互作用可以使纳米颗粒在滤纸上均匀、不可逆地吸附，用超纯水洗净浸泡后的滤纸片。得到金银核壳纳米粒子滤纸基底，选择4-MBA作为拉曼信号分子对基底进行SERS表征。巯基对金属的高亲和力导致在金银核壳纳米粒子表面形成了一层4-MBA分子。底物在100μL 4-MBA溶液中浸泡30min，然后用乙醇洗涤，去除底物上的非特异性结合分子。

步骤四，细菌培养及SERS信号采集：

将活化后的不同浓度的每种细菌菌液3μL分别滴加到步骤四得到的基底上，立即进行SERS测量。每个细菌至少测量二十次，取其SERS光谱平均值

步骤五，处理SERS光谱：