[发明专利]一种基于Au@Ag NPs滤纸基底对三种食源性致病菌检测方法

权利要求书

1.一种基于Au@Ag NPs滤纸基底对三种食源性致病菌检测方法。其特征在于：合成了一种Au@Ag NPs溶胶，利用滤纸片浸泡得到基底，以金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌为目标对象，通过增加细菌与SERS基底的接触，增强细菌的SERS信号，将主成分分析方法与SERS光谱结合，可有效的对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌进行分类和鉴定；

具体包括以下步骤：

步骤一，制备金纳米颗粒：

将100ml四氯金酸搅拌加热至沸腾，然后快速加入3ml柠檬酸钠溶液，待到溶液再次沸腾后继续搅拌加热30min，可得到红色透明的金纳米粒子溶胶；

步骤二，采用种子生产法制造金银核壳纳米粒子：

将步骤一得到的金纳米颗粒通过离心浓缩5倍后，取2ml浓缩的金纳米粒子和1ml柠檬酸钠加入烧瓶中在室温下搅拌5min。随后将烧瓶移至50℃水浴锅中，加入2ml抗坏血酸搅拌15min，在三种混合物搅拌的同时将0.8ml硝酸银溶液滴入混合物中，待其滴加完后继续搅拌30min，得到金银核壳纳米粒子溶胶；

步骤三，浸涂法制备金银核壳纳米粒子滤纸基底：

将圆形滤纸片浸泡在步骤二得到的金银核壳纳米粒子溶胶中，在不需要任何化学交联过程的情况下，范德瓦尔斯相互作用可以使纳米颗粒在滤纸上均匀、不可逆地吸附，用超纯水洗净浸泡后的滤纸片，得到金银核壳纳米粒子滤纸基底，选择4-MBA作为拉曼信号分子对基底进行SERS表征，巯基对金属的高亲和力导致在金银核壳纳米粒子表面形成了一层4-MBA分子，底物在100μL 4-MBA溶液中浸泡30min，然后用乙醇洗涤，去除底物上的非特异性结合分子；

步骤四，细菌培养及SERS信号采集：

将活化后的不同浓度的每种细菌菌液3μL分别滴加到步骤四得到的基底上，立即进行SERS测量；每个细菌至少测量二十次，取其SERS光谱平均值；

步骤五，处理SERS光谱：

分别在底物上滴加3μL不同浓度的金黄色葡萄球菌，立即进行SERS检测，采用吸水性好的柔性基底(滤纸)进行SERS分析，激光的热效应会引起基底变形，影响金银核壳纳米粒子在滤纸上的分布，改变基底的SERS性能，对细菌的SERS光谱进行归一化处理，范围在0到1之间，并对其进行主成分方法分析。

2.根据权利要求1所述的食源性致病菌的检测方法，其特征在于，步骤一中，所述的四氯金酸溶液质量分数为0.01％、柠檬酸钠溶液的浓度为1％，制备的金纳米粒子为12nm。

3.根据权利要求1所述的食源性致病菌的检测方法，其特征在于，步骤二中，所述的浓缩的金纳米粒子的操作是将其置于11000rpm条件下离心40min；

所述抗坏血酸溶液浓度为10mmol/L；

在三种混合物搅拌的同时用注射器以0.08mL/min的速度将0.8ml的硝酸银溶液滴加入混合物中，硝酸银溶液的浓度为10mmol/L。

4.根据权利要求1所述的食源性致病菌的检测方法，其特征在于，步骤三中，浸泡在金银核壳纳米粒子溶胶中的滤纸片直径为6mm，浸泡时间为2h，制备的基底可以保存在超纯水中。

5.根据权利要求1所述的食源性致病菌的检测方法，其特征在于，步骤五中，不同浓度的金黄色葡萄球菌分别为10⁴cfu/mL、10⁵cfu/mL、10⁶cfu/mL、10⁷cfu/mL和10⁸cfu/mL。