[发明专利]玉米种植地生物法改善连作障碍微生物菌剂及其制备方法

权利要求书

1.玉米种植地生物法改善连作障碍微生物菌剂，其特征在于：包括以下微生物菌株：侧孢芽孢杆菌C1TB-11、短小芽孢杆菌C1TB-17、恶臭假单胞菌C1GB-15和灰黄青霉C1TF-24；且侧孢芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、恶臭假单胞菌和灰黄青霉按体积比为1:1:1:1的比例混合制成；

有效活菌数为：侧孢芽孢杆菌4.0×10⁸cfu/g，短小芽孢杆菌4.0×10⁸cfu/g、恶臭假单胞菌5.0×10⁸cfu/g、灰黄青霉5.0×10⁸cfu/g；其中，

所述侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)C1TB-11，于2021年9月9日保存于甘肃省工业微生物菌种保藏中心，保藏号：GSICC 32851；

所述短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)C1TB-17，于2021年9月9日保存于甘肃省工业微生物菌种保藏中心，保藏号：GSICC 32852；

所述恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)C1GB-15，于2021年9月9日保存于甘肃省工业微生物菌种保藏中心，保藏号：GSICC 31637；

所述灰黄青霉(Penicillium griseofulvum)C1TF-24，于2021年9月9日保存于甘肃省工业微生物菌种保藏中心，保藏号：GSICC 61606。

2.根据权利要求1所述的玉米种植地生物法改善连作障碍微生物菌剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一：微生物斜面种子的制备：将侧孢芽孢杆菌C1TB-11、短小芽孢杆菌C1TB-17和恶臭假单胞菌C1GB-15接种于细菌固体斜面培养基，30℃恒温培养48h后，即为种子斜面；将灰黄青霉C1TF-24接种于真菌固体斜面培养基，30℃恒温培养48h后，即为种子斜面；

步骤二：微生物液体种子的培养：将侧孢芽孢杆菌C1TB-11、短小芽孢杆菌C1TB-17和恶臭假单胞菌C1GB-15接种于细菌液体培养基，在温度为30℃、转速为200r/min震荡培养30h后，即为液体种子；将灰黄青霉C1TF-24接种于真菌液体培养基，在温度为30℃，转速为200r/min震荡培养36h后，即为液体种子；

步骤三：菌株液体扩大培养：将侧孢芽孢杆菌C1TB-11、短小芽孢杆菌C1TB-17和恶臭假单胞菌C1GB-15在接种于50L发酵罐中，培养基为细菌液体培养基，接种量为10％，在温度为30℃、转速为200r/min培养30h，直至侧孢芽孢杆菌C1TB-11菌液中有效活菌数为4×10⁸～6×10⁸cfu/mL，短小芽孢杆菌C1TB-17菌液中有效活菌数为4×10⁸～6×10⁸cfu/mL，恶臭假单胞菌C1GB-15在菌液中有效活菌数为5×10⁸～7×10⁸cfu/mL；将灰黄青霉C1TF-24接种于50L发酵罐中，培养基为真菌液体培养基，接种量为10％，在温度为30℃、转速为200r/min培养36h，直至菌液中有效活孢子数为5×10⁸～8×10⁸cfu/mL；

步骤四：微生物菌剂的制备：将步骤三中分别扩大培养的微生物菌剂按体积比1：1：1：1混合均匀，即得到玉米种植地生物法改善连作障碍微生物菌剂。

3.根据权利要求2所述的玉米种植地生物法改善连作障碍微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤一中细菌固体斜面培养基为：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g、琼脂20g、蒸馏水1000mL，pH至7.0，在121℃高压蒸汽灭菌20min；

真菌固体斜面培养基为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、蒸馏水1000ml,自然pH；马铃薯洗净去皮后称取200g并切成小块，加水煮沸20分钟，用八层纱布过滤，加热，根据实际需要加入琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，加入葡萄糖搅拌均匀，冷却后再补足水分至1000毫升，高压121℃灭菌20分钟后备用。