[发明专利]RNA提取试剂盒及RNA提取方法

说明书

本发明涉及一种RNA提取试剂盒及RNA提取方法。该RNA提取试剂盒包括变性裂解剂和蛋白分离剂，变性裂解剂包括异硫氰酸胍和β‑巯基乙醇，异硫氰酸胍的摩尔量和β‑巯基乙醇的体积之比为(1mol～6mol):(1mL～15mL)；蛋白分离剂包括辛酸。将异硫氰酸胍、β‑巯基乙醇与辛酸结合使用，则能够在不含苯酚和氯仿的条件下，提高RNA得率，减少GC含量低的RNA的丢失。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别是涉及一种RNA提取试剂盒及RNA提取方法。

背景技术

RNA是生命体的遗传信息载体，包括编码RNA与非编码RNA，近些年来，科学家发现非编码RNA在生命体中也起着非常重要的作用，对非编码RNA的关注度越来越高。miRNA是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，研究发现其表达谱随着生命体状态的改变会发生特异性改变，能作为一类新兴的标志物，而提取出高质量的miRNA是研究miRNA的前提。

传统的RNA提取方法主要有基于柱分离技术的提取方法和Trizol-氯仿萃取法。但是，基于柱分离技术的提取方法提取miRNA的得率低，且GC含量低的miRNA部分丢失；Trizol-氯仿萃取法中所用到的Trizol中的苯酚和氯仿具有较高毒性，对操作人员的健康影响很大，而且提取过程中同样会导致miRNA部分降解，尤其是GC含量低的miRNA。

发明内容

基于此，有必要提供一种毒性较低、能提高RNA得率且减少GC含量低的RNA的丢失的RNA提取试剂盒。

此外，还提供一种RNA提取方法。

一种RNA提取试剂盒，包括变性裂解剂和蛋白分离剂，上述变性裂解剂包括异硫氰酸胍和β-巯基乙醇，异硫氰酸胍的摩尔量和β-巯基乙醇的体积之比为(1mol～6mol):(1mL～15mL)；上述蛋白分离剂包括辛酸。

上述RNA提取试剂盒包括变性裂解剂和蛋白分离剂，变性裂解剂包括异硫氰酸胍和β-巯基乙醇，异硫氰酸胍能够迅速溶解蛋白质，破碎细胞结构，破坏核蛋白，有效萃取出RNA，同时它能抑制细胞释放出的核酸酶；β-巯基乙醇能够破坏核糖核酸酶的二硫键，使核糖核酸酶变性，防止核糖核酸酶对RNA的降解；蛋白分离剂包括辛酸，辛酸与蛋白或脂质具有很强的结合能力，能够有效地分离RNA-蛋白复合物；将异硫氰酸胍、β-巯基乙醇与辛酸结合使用，则能够在不含苯酚和氯仿的条件下，提高RNA得率，减少GC含量低的RNA的丢失。

在其中一个实施例中，异硫氰酸胍的摩尔量和β-巯基乙醇的体积之比为(2mol～5mol):(7mL～13mL)。

在其中一个实施例中，变性裂解剂还包括第一缓冲液，第一缓冲液选自柠檬酸钠缓冲液及Tris-EDTA缓冲液中的一种。

在其中一个实施例中，蛋白分离剂还包括第二缓冲液，第二缓冲液选自乙酸钠缓冲液、氯化钠溶液及氯化铵溶液中的一种。

在其中一个实施例中，第一缓冲液包含柠檬酸钠，柠檬酸钠与异硫氰酸胍的摩尔量之比为(5mmol～30mmol):(1mol～6mol)。

在其中一个实施例中，第二缓冲液包含乙酸钠，乙酸钠的摩尔量与辛酸的体积之比为(0.01mol～1mol):(2mL～25mL)。

在其中一个实施例中，RNA提取试剂盒还包括沉淀剂，沉淀剂包括异丙醇、无水乙醇和糖原中的至少一种。

在其中一个实施例中，沉淀剂包括异丙醇、无水乙醇和糖原，异丙醇的体积、无水乙醇的体积和糖原的质量之比为(20μL～30μL):(5μL～7.5μL):(1μg～5μg)。