[发明专利]单个抗原特异性转基因杂交瘤细胞筛选方法

权利要求书

1.单个抗原特异性转基因杂交瘤细胞筛选方法，其特征在于，所述方法包括：制备表达EGF-R-AVI-tag融合蛋白的转基因Sp2/0骨髓瘤细胞，结合传统杂交瘤技术的脾细胞融合技术，获得可在细胞膜展示分泌型特异性抗体的杂交瘤细胞，并利用单细胞分选系统实现对单个特异性转基因杂交瘤细胞的筛选；

所述EGF-R-AVI-tag融合蛋白为：

(a)由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)SEQ ID NO:1所示序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等功能的由(a)衍生的蛋白质。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，编码EGF-R-AVI-tag融合蛋白的核酸序列通过质粒导入Sp2/0骨髓瘤细胞，或通过基因工程手段整合到Sp2/0骨髓瘤细胞的基因组中。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，编码EGF-R-AVI-tag融合蛋白的核酸序列通过PiggyBac转座系统整合到Sp2/0骨髓瘤细胞的基因组中。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在与脾细胞融合之前，还包括以下步骤：对转基因Sp2/0骨髓瘤细胞依次进行体外生物素化和PE-链霉亲和素标记，然后通过FACS富集并制备单个PE-链霉亲和素标记的转基因Sp2/0骨髓瘤细胞，用于后续细胞融合。

5.按照权利要求1-4任一项所述方法筛选得到的单个特异性转基因杂交瘤细胞。

6.权利要求1-4任一项所述方法或权利要求5所述转基因杂交瘤细胞在单克隆抗体制备中的应用。