[发明专利]一种用于近红外荧光示踪剂活化染料ZW800-Bop-NHS的制备方法

说明书

本发明公开了一种用于近红外荧光示踪剂的染料活化方法，该法以近红外光染料ZW800‑OH酸与活化剂和络合剂作用下，形成具有活化性能的活性染料ZW800‑Bop‑NHS，活化后的染料更易于与多肽耦合，形成主动靶向性强、灵敏度高的高效示踪剂，并且所形成的近红外光染料具有良好的水溶性和荧光量子产率高等优点。

技术领域

本发明提供一种用于近红外荧光示踪剂的染料活化方法，涉及近红外手术导航荧光分子、动物成像及细胞标记等领域。

技术背景

近红外(NIR)光具有穿透深、吸收小、组织散射较少等明显优势。其在图像引导干预的应用中具有巨大潜力，并可提供优越的信号背景比(SBR)。目前，唯一获得美国FDA批准的NIR荧光团吲哚菁绿(ICG)已被用于各种临床手术造影。有关近红外荧光染料法的优缺点，国内外学者均进行了研究。吲哚菁绿的优势:(1)检出率高，创伤小，无辐射，易于实施；(2)吲哚菁绿在乳晕外缘进行皮内或皮下注射，经皮内吸收，不会出现染料纹身或者皮肤坏死，而且显影较快，图像较清晰；(3)吲哚菁绿能实时、动态检测皮下淋巴管和淋巴结，准确定位SLN，从而有助于设计手术切口。吲哚菁绿具有以下缺点：(1)吲哚菁绿颗粒较小，具有第二、三级淋巴结显像的缺点。(2)第一代的荧光探测仪必须在暗室中观察荧光，无法显示人体组织。第二代荧光探测仪－荧光脉管成像系统虽然克服了这一缺陷，可在自然光条件下，可在显示屏上获得荧光染色的淋巴管和淋巴结的实时图像，但仍难以实现肉眼可见的实时操作。(3)穿透距离有限(不足1cm)，深部的淋巴管及淋巴结无法观测到，导致了荧光成像仪无法全景的对腋窝引流状况进行观察，因此容易漏掉部分SLN，造成较高的假阴性率。因此，吲哚菁绿作为前哨淋巴结活检示踪剂进行临床应用尚存在极大的瓶颈。本实验组根据近红外光染料ZW800穿透深，吸收小等特性，研究其在作为转移淋巴结示踪剂时的表现，发现其在鉴定转移淋巴结时具有良好的主动靶向作用，可以有效的区分转移淋巴结和正常淋巴结。

发明内容

发明目的在于：提供了一种用于近红外荧光示踪剂的染料活化方法，该法活化后的染料更易于与多肽耦合，形成主动靶向性强、灵敏度高的高效示踪剂。

为了实现上述发明的目的，其具体的技术方案如下：

一种用于近红外荧光示踪剂活化染料ZW800-Bop-NHS的制备方法，包括以下工艺步骤：

步骤A、搅拌下将称量的染料ZW800-OH加入计量的溶剂中，加热35-45℃，搅拌使染料完全溶解，形成溶液。

步骤B、向上述溶液中依次加入称量的羧基活化剂和缩合剂，搅拌下，缓慢滴加氢氧化钾溶液，调节Ph值7-8。

步骤C，维持温度40-50℃，持续反应2-3小时，反应毕，得到含特殊活化形式的ZW800-Bop-NHS混合反应液。

步骤D、所述步骤C所制得溶液减压回收溶剂，向釜底产物中加入计量的异丙醇溶剂，搅拌打浆，使浆料中有机杂质充分溶于异丙醇中，冷却体系温度至0-10℃，过滤，洗涤，滤液留存进行后处理，滤饼干燥，得到蓝色ZW800-Bop-NHS粉末活性物质(如分子式1)。

O

优选的，所述步骤A中，所述溶剂为二甲亚砜，甲基异丁酮，N-甲基吡咯烷酮。

优选的，所述步骤A中，所述染料ZW800-OH与溶剂的质量比为1:20-50。

优选的，所述步骤B中，所述羧基活化剂为(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)，N-羟基丁二酰胺，丁二酰亚胺中的一种或两种。

特别地，所述步骤B中，所述羧基活化剂为N-羟基丁二酰胺。

优选的，所述步骤B中，所述缩合剂为六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐。