[发明专利]沉积物有机磷酸酯及代谢产物LC-MS/MS分析方法

权利要求书

1.沉积物有机磷酸酯及代谢产物LC-MS/MS分析方法，其特征在于，包括：

配制不同浓度梯度的有机磷酸酯及代谢产物的标准混合溶液，加入内标化合物，进行LC-MS/MS测定，以各个有机磷酸酯及代谢产物与内标化合物的浓度比为横坐标、峰面积比为纵坐标，绘制各个有机磷酸酯及代谢产物的内标校正曲线；

将海洋沉积物样品进行除杂、冻干、研磨前处理，得测量样品，加入内标化合物，用溶剂溶解、超声提取、固相萃取、洗脱、浓缩，得浓缩物样品，复溶，进行LC-MS/MS测定，根据标准混合溶液中各个有机磷酸酯及代谢产物的保留时间、母离子及特征碎片离子信息定性分析各个有机磷酸酯及代谢产物，将样品中测得的各个有机磷酸酯及代谢产物与内标化合物的峰面积比带入内标校正曲线，定量分析各个有机磷酸酯及代谢产物；

所述有机磷酸酯及代谢产物包括磷酸三乙酯，磷酸三丙酯，磷酸三正丁酯，磷酸三辛酯，磷酸三苯基酯，磷酸-2-乙基己酯二苯酯，磷酸三(2-氯乙基)酯，磷酸三(2-氯丙基)酯，磷酸三(1，3-二氯异丙基)酯，磷酸三(丁氧基乙基)酯，磷酸三甲苯酯，磷酸三异丁酯，双(2-丁氧乙基)-3-羟基(2-丁氧乙基)磷酸酯，2-羟基乙基-双(2-丁氧乙基)磷酸酯；

液相色谱条件为：以ZOBARX C₁₈色谱柱作为分离柱，长度100mm，内径2.1mm，填料粒径1.8μm；进样量5μL，柱温40℃；以含有5mmol/L乙酸铵和体积浓度为0.1％的甲酸的水溶液作为水相，以甲醇作为有机相；

质谱条件为：离子源温度340℃；毛细管温度350℃；鞘气温度350℃；鞘气流速11L/min；辅助气流量9L/min；电喷雾电压为4kV。

2.如权利要求1所述的沉积物有机磷酸酯及代谢产物LC-MS/MS分析方法，其特征在于，内标化合物为TNBP-d27，TPHP-d15，TCIPP-d18或BBOEHEP-d4。

3.如权利要求2所述的沉积物有机磷酸酯及代谢产物LC-MS/MS分析方法，其特征在于，绘制内标校正曲线时，用移液枪准确吸取0.5μL、1μL、2μL、5μL、10μL、20μL、50μL、100μL、200μL、500μL的1mg/L的标准混合工作液，得到十种体积的标准混合工作液，每个体积的标准混合工作液中均加入100μL的1mg/L的内标化合物混合溶液，各自用甲醇稀释到1mL，振荡混匀得到十种不同浓度的标准混合工作液：0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL。

4.如权利要求1所述的沉积物有机磷酸酯及代谢产物LC-MS/MS分析方法，其特征在于，将海洋沉积物样品进行除杂、冻干、研磨过80目筛前处理，得测量样品。

5.如权利要求4所述的沉积物有机磷酸酯及代谢产物LC-MS/MS分析方法，其特征在于，将2g测量样品加入内标化合物，采用10mL溶剂，于室温超声提取、离心，收集上清液，重复2-3次，合并得提取液，氮气流缓慢吹至1mL，加入40mL超纯水，采用C₁₈固相萃取柱进行富集和净化，用淋洗液淋洗并收集洗脱液，氮气流缓慢吹至近干燥状态后，得浓缩物样品，用200μL甲醇复溶，进行LC-MS/MS测定。

6.如权利要求5所述的沉积物有机磷酸酯及代谢产物LC-MS/MS分析方法，其特征在于，溶剂为乙腈。

7.如权利要求5所述的沉积物有机磷酸酯及代谢产物LC-MS/MS分析方法，其特征在于，淋洗液为乙腈。

8.如权利要求1所述的沉积物有机磷酸酯及代谢产物LC-MS/MS分析方法，其特征在于，洗脱为梯度洗脱，梯度洗脱设置为0-7min、7-16min、16-20min、20-20.1min、20.1-24min、24min以后，水相与有机相的体积比分别为40％:60％、20％:80％、3％:97％、3％:97％、40％:60％、40％:60％。

9.如权利要求1所述的沉积物有机磷酸酯及代谢产物LC-MS/MS分析方法，其特征在于，母离子及特征碎片离子信息的获得方式为：

分别配制浓度为5μg/mL的各个有机磷酸酯及代谢产物的标准溶液，采用高效液相色谱三重四级杆质谱仪器配备的自动进样系统直接进样，在电喷雾正离子模式下采用全扫描模式进行分析检测，确定各个有机磷酸酯及代谢产物的母离子；

对各个有机磷酸酯及代谢产物施加不同碰撞能量，得到各个有机磷酸酯及代谢产物的二级碎片离子，各自选择两个响应强度较高的碎片离子作为特征碎片离子。