[发明专利]抗体-转座酶融合蛋白及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202111275800.0 | 申请日： | 2021-10-29 |
| 公开（公告）号： | CN114106196A | 公开（公告）日： | 2022-03-01 |
| 发明（设计）人： | 陈凯;张全勇;宋宁 | 申请（专利权）人： | 陈凯;云南中科灵长类生物医学重点实验室 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N9/12;C12N15/70;C07K1/22;C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 湖南兆弘专利事务所(普通合伙) 43008 | 代理人： | 陈晖 |
| 地址： | 650500 云南省昆明市*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抗体 转座酶 融合 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种抗体-转座酶融合蛋白，其特征在于，所述抗体-转座酶融合蛋白包括His蛋白、TEV蛋白、抗体蛋白和Tn5蛋白，所述His蛋白依次与TEV蛋白、抗体蛋白、Tn5蛋白通过linker蛋白进行融合连接。
2.根据权利要求1所述的抗体-转座酶融合蛋白，其特征在于，所述抗体-转座酶融合蛋白为His-TEV-anti rabbit IgG-Tn5和His-TEV-anti mouse IgG-Tn5中的一种或多种；
所述His-TEV-anti rabbit IgG-Tn5的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述His-TEV-anti mouse IgG-Tn5的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一种权利要求1或2所述抗体-转座酶融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将目的基因插入到载体质粒的克隆位点获得可用于蛋白表达的重组质粒；
S2、将所述重组质粒转化至感受态细胞中，进行诱导表达得到抗体-转座酶融合蛋白。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括以下步骤：
S3、将所述抗体-转座酶融合蛋白用镍柱特异性结合组氨酸标签进行分离纯化。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述S1具体为：
S1-1、根据重链抗体序列的起始密码子和终止密码子设计引物对A1和A2，进行PCR扩增获得目的片段；
S1-2、从目的片段插入位点的两侧设计引物对B1和B2，进行PCR扩增获得载体片段；
S1-3、将目的片段和载体片段进行混合，孵育得到可用于蛋白表达的重组质粒。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述A1的DNA序列如SEQ IDNO.3所示；所述A2的DNA序列如SEQ ID NO.4所示；所述B1的DNA序列如SEQID NO.5所示；所述B2的DNA序列如SEQ ID NO.6所示。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述S2具体为：
S2-1、将重组质粒转化至感受态细胞中获得转化菌落；
S2-1、挑取单克隆进行扩大培养；
S2-3、加入IPTG诱导表达获得抗体-转座酶融合蛋白。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述S3具体为：
S3-1、采用高压破碎法将大肠杆菌裂解，将裂解液过滤取上清液；
S3-2、将镍珠加入到上清液中，孵育，用Wash buffer进行洗杂，用Elution buffer进行洗脱，获得纯化的蛋白。
9.一种权利要求1或2所述抗体-转座酶融合蛋白在制备单细胞的多蛋白位点的ChIP-seq分析的检测试剂盒中的应用。
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