[发明专利]免疫细胞体外诱导扩增以及保存方法

说明书

本发明提供了免疫细胞体外诱导扩增以及保存方法，涉及xx技术领域，该免疫细胞体外诱导扩增以及保存方法，该方法包含以下操作步骤：S1、利用免疫抗体在在培养皿中贴壁培养，获取抗体包被培养皿；S2、刺激免疫细胞，从而激活专用培养基，分离制取单个细胞核，并且容置于上述包被培养皿中，培养后制取免疫细胞；S3、利用免疫细胞扩增培养基将上述单个核细胞进行一次扩增培养，得到诱导扩增的免疫细胞。用户不需要将手伸入到保温室的内部，避免用户被烫伤，也避免保温室暴露内空气中的时间过长，产生交叉污染，降低实验安全风险，避免导致实验数据失真，影响试验数据的准确性。

技术领域

本发明涉及免疫细胞体外诱导扩增技术领域，尤其涉及免疫细胞体外诱导扩增以及保存方法。

背景技术

生物免疫细胞治疗是通过体外培养、增殖、激活，回输体内诱导自体抗病毒免疫应答，从而使得人体抗病毒免疫被激活后源源不断地产生抗病毒的物质杀灭病毒。免疫细胞对肿瘤细胞、细菌等的识别能力很强，如同“细胞导弹”，能精确“点射”肿瘤细胞或细菌，但不会伤及“无辜”的正常细胞，是一种十分有效的治疗方式。

现有的技术手段中，对于免疫细胞体外诱导扩增培养体系繁杂、免疫效果不佳，而且在实际实验操作的过程中，容易产生交叉污染，导致数据失真，存在安全上的风险。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了免疫细胞体外诱导扩增以及保存方法。

本发明通过以下技术手段实现解决上述技术问题的：免疫细胞体外诱导扩增以及保存方法，该方法包含以下操作步骤：

S1、利用免疫抗体在在培养皿中贴壁培养，获取抗体包被培养皿；

S2、刺激免疫细胞，从而激活专用培养基，分离制取单个细胞核，并且容置于上述包被培养皿中，培养后制取免疫细胞；

S3、利用免疫细胞扩增培养基将上述单个核细胞进行一次扩增培养，得到诱导扩增的免疫细胞；

S4、利用免疫细胞专用诱导培养基将一次扩增的免疫细胞进行分化培养，获取分化后的免疫细胞；

S5、利用免疫细胞激活培养基将分化后的一次扩增免疫细胞进行二次激活和扩增培养，获得二次免疫细胞；

S6、利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞，得到冻存的二次免疫细胞；将冻存的二次免疫细胞置于恒温的水浴装置中融化，并与一次免疫细胞的冷冻复苏液混合，得到复苏细胞混合液；

S7、将复苏细胞混合液进行离心处理，得到复苏的免疫细胞。

进一步的，所述冷冻复苏液包含HAS、右旋糖酐40、FBS，以DMEM/F12培养基为基础培养基。

进一步的，所述免疫细胞扩增培养基由200U/mL的IL-1、350U/mL的IL-2和0.01KE/mL吡柔比新构成，以OpTmizerTMCTSTM无血清培养基为基础培养基。

进一步的，所述免疫细胞冻存液由DMSO、FBS、HAS+、0.001g/mL的白酒草皂苷R构成，以DMEM/F12培养基为基础培养基。

进一步的，所述水浴装置包括水浴箱，所述水浴箱内部开设有保温室，所述保温室靠近内壁一侧设置有用于供热的电热丝，所述保温室的内部收容有培养皿，所述保温室的内部容纳有容纳腔体，用于盛放培养皿；所述水浴装置的底端设置有驱动组件，所述驱动组件的顶端延伸入保温室的内部，用于对驱动容纳腔体沿着保温室的内部轴向升降。

进一步的，所述容纳腔体的内底面设置有固定座，所述固定座的表面卡接有若干个培养皿，若干个所述培养皿呈阵列分布，所述固定座的顶面开设有用于容纳培养皿的固定槽，所述固定槽的内壁开设有安装槽，所述安装槽内部固定有橡胶条，所述橡胶条远离固定座的一侧抵住培养皿的表面。