[发明专利]一种多维液相色谱联用质谱检测牛奶中肠毒素C的方法

说明书

本发明公开了一种多维液相色谱联用质谱检测牛奶中肠毒素C的方法，包括以下步骤：步骤S1：选择二维分离模式，搭建二维液相色谱平台，包括第一维离子交换液相色谱和第二维反相液相色谱；步骤S2：牛奶通过所述二维液相色谱平台分离得到馏分，所述馏分完整蛋白的质谱鉴定和酶解肽质谱鉴定，鉴定肠毒素C。本发明提供的多维液相色谱质谱联用检测牛奶中肠毒素C的方法，具有鉴定准确、快速有效、灵敏度高等优势。解决了现有ELISA方法准确性低的弊端，自动化程度高，提高了检测通量，降低了试验成本，结果判定方便准确，更加具有实用性。

技术领域

本发明涉及食品安全微生物检测技术领域，具体涉及一种多维液相色谱联用质谱检测牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素C的方法。

背景技术

金黄色葡萄球菌肠毒素C是由金黄色葡萄球菌分泌的一种毒素，也是最常见的导致金黄色葡萄球菌食物中毒的五种经典肠毒素之一，因此对肠毒素C进行检测有利于保障食品安全健康，预防食物中毒事件发生。国家标准GB4789.10-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》中采用酶联免疫吸附试验法(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)检测肠毒素，但该方法易受食品基质干扰，存在不同肠毒素间存在交叉反应，易导致假阳性、假阴性结果。

因此，本领域的技术人员致力于开发一种肠毒素C的新型检测方法，基于多维液相色谱联用质谱技术实现对肠毒素C特异性检测。

发明内容

本发明针对现有技术的上述缺陷，提供一种多维液相色谱联用质谱检测牛奶中肠毒素C的方法，包括以下步骤：

步骤S1：选择二维分离模式，搭建二维液相色谱平台，包括第一维离子交换液相色谱和第二维反相液相色谱；

步骤S2：牛奶通过所述二维液相色谱平台分离得到馏分，所述馏分完整蛋白的质谱鉴定和酶解肽质谱鉴定，鉴定肠毒素C。

优选地，第一维离子交换液相色谱中，色谱柱为阳离子交换色谱柱。

优选地，第一维离子交换液相色谱中，流动相pH为4.5～5.5。

优选地，第一维离子交换液相色谱中，肠毒素C在第一维色谱柱的洗脱位置为35～40min。

优选地，第一维离子交换液相色谱中，洗脱条件为：

流动相：A相：20mM K2HPO4(pH＝5.3)+10％ACN；B相：20mM K2HPO4(pH＝5.3)+10％ACN+1M NaCl；

洗脱条件：0～10min 0％B相，20～30min 8％～9％B相，30.1～50min 25％～26％B相，70～100min 100％B相，100～120min 0％B相；

流速：1mL/min；

检测波长：215nm。

优选地，第二维反相液相色谱中，色谱柱为C8色谱柱。

优选地，第二维反相液相色谱中，肠毒素C在第二维色谱柱的洗脱位置为24～26min。

优选地，第二维反相液相色谱中，洗脱条件为：

流动相：A相：乙腈-水(5％+95％，0.1％TFA)；B相：乙腈(0.1％TFA)；

洗脱条件：0～2min 5％B相，5～60min 33％～38％B相，60.1～90min 95％B相，90～120min 0％B相；

流速：0.2mL/min；

检测波长：215nm。

优选地，二维分离得到的馏分进行完整蛋白的质谱鉴定的具体步骤为：