[发明专利]一种阻断PD1与PDL1结合的抗人PDL1纳米抗体的制备方法及其编码序列

说明书

本发明公开了一种抗人PDL1纳米抗体以及其VHH链，包括框架区FR和互补决定区CDR区，框架区选自FR1‑FR4的氨基酸序列，CDR区选自CDR1‑CDR3氨基酸序列。同时还公开了编码该纳米抗体的基因序列和表达该纳米抗体的宿主细胞。该PDL1纳米抗体分子量小，特异性强。该纳米抗体能在大肠杆菌内可溶性表达蛋白，制备方法简单，成本低廉，在对人PDL1检测方面以及在抗肿瘤药物中具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医学或者生物制药技术领域，涉及一种针对阻断PD1与PDL1结合的抗人PDL1纳米抗体的制备方法及其编码序列。

背景技术

目前肿瘤的免疫治疗方法是肿瘤治疗方法中较为有前景的方法之一。免疫治疗的主要靶点是针对免疫检查点分子。T细胞介导的细胞免疫在肿瘤细胞的识别和杀伤方面都起着重要作用，由于癌细胞表达的蛋白质突变以及异常加工而产生的新抗原，这些特异性抗原可以被T细胞表面受体所识别，从而激发免疫系统的作用，消除癌细胞。但是T细胞表面受体在识别特异性抗原的过程有一系列的免疫检查点分子调节。在正常体内，免疫检查点是免疫系统维持自我耐受和阻止自身免疫的抑制途径。但是癌细胞能利用免疫检查点的机制，通过靶向作用免疫检查点，从而逃避 T细胞调节的免疫反应。当身体受到肿瘤攻击时，免疫检查点被激活，从而抑制自身免疫，促进肿瘤细胞生长和逃逸。

目前对免疫检查点抑制剂药物的研发应用在肿瘤的治疗领域取得了较好的结果，免疫检查点抑制剂的研究引起了越来越多的关注。特别是针对程序性死亡配体1（PDL1，B7-H1，CD274)和程序性死亡受体-1（PD1，CD279）的药物，对多种类型肿瘤的治疗均有显著效果。PD-1是在活化T细胞表面诱导的一种共刺激分子。是CD4⁺和CD8⁺T细胞表达的CD28免疫球蛋白家族的成员，与B7家族中的配体（PD-L1和PD-L2）相互作用，PD-L1比PD-L2表达广泛，PD-L1 (B7-H1,CD274)在肿瘤细胞、以及包括树突状细胞、巨噬细胞、B细胞和活化T细胞等抗原呈递细胞（APCs）上均表达，因此，PDL1常被用作抗癌药物设计的靶点。在正常细胞中，PD-1与其配体的结合限制了T细胞的活性，从而防止过度刺激和维持对自身抗原的免疫耐受。但是肿瘤细胞通过上调表达PDL1蛋白，PD-1/PD-L1相互作用，减弱内源性抗肿瘤免疫反应，抑制T淋巴细胞增殖、细胞因子释放和细胞毒性，导致肿瘤特异性T细胞的耗竭和凋亡。因此，阻断PD-1/PD-L1相互作，能增强T细胞活性，从而达到肿瘤免疫治疗的效果。用阻断PD-1/PDL1通路的抗体进行免疫治疗，已显示出令人印象深刻的临床结果：肿瘤持续消退，患者生存率提高。目前FDA通过的靶向PD1的单克隆抗体有Nivolumab和Pembrolizumab，靶向PDL1的单克隆抗体有Atezolizumab、avelumab、durvalumab。

目前针对PDL1的抗体大多数为单克隆抗体，但是传统的单克隆抗体的制备过程较复杂，生产成本较高。除此之外，单克隆抗体的分子量较大，存在组织穿透能力较差的问题，不能在肿瘤组织处发挥最大的治疗效果。纳米抗体，是目前最小的可以结合抗原的功能性片段，只有单克隆抗体大小的1/10。由于其不同于单抗的独特结构，所以不会造成红细胞和血小板发生凝聚，则在治疗过程中不会产生出血和血小板减少等副作用。除此之外，纳米抗体还具有可溶性好，稳定性较高，在原核表达体系中也能表达，这就克服了传统抗体制备周期长，制造成本较高的问题，是一种非常有应用前景的新型抗体分子。

目前针对PDL1靶点的纳米抗体还未有临床应用，所以本领域迫切需要开发新的有效针对PDL1靶点的特异性纳米抗体。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供一种可以阻断PD1与其配体PDL1结合的抗PDL1纳米抗体，同时提供该纳米抗体的编码序列及纳米抗体的制备方法。