[发明专利]一种阻断PD1与PDL1结合的抗人PDL1纳米抗体的制备方法及其编码序列

权利要求书

1.一种人PDL1纳米抗体的VHH链，包括框架区FR区和抗原互补决定区CDR区，其特征在于，所述框架区FR区来自其FR1-FR4的氨基酸序列：

SEQ ID No .1所示的FR1，SEQ ID No .2 所示的FR2，SEQ ID No .3 所示的FR3 ， SEQID No .4 所示的FR4；

或SEQ ID No .5所示的FR1，SEQ ID No .6 所示的FR2，SEQ ID No .7 所示的FR3 ，SEQ ID No .8 所示的FR4；

或SEQ ID No .9所示的FR1，SEQ ID No .10所示的FR2 ，SEQ ID No .11所示的FR3 ，SEQ ID No .12 所示的FR4；

或SEQ ID No .13所示的FR1，SEQ ID No .14所示的FR2，SEQ ID No .15 所示的FR3，SEQ ID No .16 所示的FR4；

或SEQ ID No .17所示的FR1，SEQ ID No .18 所示的FR2，SEQ ID No .19 所示的FR3，SEQ ID No .20 所示的FR4；

所述的抗原互补决定区CDR区选自以下的CDR1-CDR3氨基酸序列：

SEQ ID No .21所示的CDR1，SEQ ID No .22所示的CDR2，SEQ ID No .23所示的CDR3;

或SEQ ID No .24所示的CDR1，SEQ ID No .25所示的CDR2，SEQ ID No .26所示的CDR3;

或 SEQ ID No .27所示的CDR1，SEQ ID No .28所示的CDR2，SEQ ID No .29所示的CDR3;

或SEQ ID No .30所示的CDR1，SEQ ID No .31所示的CDR2，SEQ ID No .32所示的CDR3;

或SEQ ID No .33所示的CDR1，SEQ ID No 34所示的CDR2，SEQ ID No .35所示的CDR3;

根据以上所述的人PDL1纳米抗体VHH链，其特征在于，它具有SEQ ID No .36，SEQ IDNo .37，SEQ ID No .38，SEQ ID No .39，SEQ ID No .40所示的氨基酸序列。

2.一种人PDL1纳米抗体，其特征在于，它是针对人PDL1分子表位的纳米抗体，包括具有SEQ ID No .36，SEQ ID No .37，SEQ ID No .38，SEQ ID No .39，SEQ ID No .40所示的氨基酸序列的VHH链。

3.一种DNA分子，其特征在于，它编码选自下组的蛋白质：权利要求1或2所示的人PDL1纳米抗体的VHH链，或权利要求2所示的人PDL1纳米抗体。

4.根据权利要求3所述的DNA分子，其特征在于，它具有选自以下组的DNA序列：SEQ IDNo .41，SEQ ID No .42，SEQ ID No .43，SEQ ID No .44，SEQ ID No .45。

5.一种表达载体，其特征在于，它含SEQ ID No .41，SEQ ID No .42，SEQ ID No .43，SEQ ID No .44，SEQ ID No .45所示的核苷酸序列。

6.一种宿主细胞，其特征在于，它表达针对人PDL1的纳米抗体。

7.一种制备抗PDL1纳米抗体的方法，其包括以下步骤：

（1）人PDL1真核蛋白免疫新疆双峰驼，分离外周血淋巴细胞，构建噬菌体展示文库；

（2）利用亲和筛选的方法，通过真核人PDL1蛋白筛选噬菌体展示文库；

（3）PE-ELISA的方法挑选结合PDL1阳性克隆并测序分析；

（4）PDL1重组纳米抗体的表达与纯化；

（5）抗PDL1纳米抗体的功能鉴定；

权利要求1-5所述的抗人PDL1纳米抗体的用途，其用于制备检测PDL1的诊断试剂盒，或在癌症治疗药物中的应用。