[发明专利]一种脱水达托霉素的分离纯化方法和应用

说明书

本发明属于达托霉素技术领域，特别涉及一种脱水达托霉素的分离纯化方法和应用，包括对达托霉素料液在55～60℃、加热时间大于10h的条件下进行破坏性实验的步骤；以及采用C18高压层析柱，分别以流动相为0.1wt％磷酸盐溶液和1wt％乙腈的组合，以及0.1wt％TFA和1wt％乙腈的组合进行解析的步骤；以及对解析所获的的收集液进行纳滤和冻干的步骤，以获得纯度≥99％的脱水达托霉素冻干粉。

技术领域

本发明属于达托霉素技术领域，特别涉及一种脱水达托霉素的分离纯化方法和应用。

背景技术

目前达托霉素已实现大规模的工业化生产，但是对其降解杂质，特别为脱水达托霉素的研究甚少。脱水达托霉素作为达托霉素的降解杂质之一，可显著降低药效，然而现有脱水达托霉素的标准品的纯度仅为98％左右，如专利CN103724400B所公开的分离纯化脱水达托霉素的方法所分离纯化得到的脱水达托霉素，由于其纯度不够高，难以符合在制备高质量达托霉素中作为脱水达托霉素杂质标准品的纯度要求，严重影响对高质量达托霉素杂质测定的精度。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是：提供一种分离纯度可达99％的脱水达托霉素的分离纯化方法；

进一步提供上述脱水达托霉素的分离纯化方法所分离纯化的脱水达托霉素在制备或作为脱水达托霉素标准品、对照品、校准品和质控品中至少一种的应用。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种脱水达托霉素的分离纯化方法，包括如下步骤：

S1、对达托霉素料液在55～60℃、加热时间大于10h条件下进行破坏性实验，获得料液A；

S2、将所述料液A进行C18高压柱层析，流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为0.1wt％磷酸盐溶液，所述流动相B为1wt％乙腈，与所述流动相A相对应的A泵与所述流动相B相对应的B泵的开度比为95:5，获得收集液B；

S3、将收集液B进行纳滤；

S4、将纳滤后的收集液B进行C18高压柱层析，流动相包括流动相C和流动相D，所述流动相C为0.1wt％TFA，所述流动相D为1wt％乙腈，与所述流动相C相对应的所述A泵与所述流动相D相对应的所述B泵的开度比为70:30获得收集液C；

S5、将所述收集液C进行纳滤；

S6、将纳滤后的收集液C进行冻干，获得纯度≥99％的脱水达托霉素冻干粉。

进一步提供由前述脱水达托霉素的分离纯化方法所分离纯化获得的脱水达托霉素在制备或作为脱水达托霉素标准品、对照品、校准品和质控品中至少一种的应用。

本发明的有益效果在于：通过对达托霉素料液进行破坏性实验，可有效促进达托霉素料液中达托霉素脱水，以提高料液A中的脱水达托霉素的含量；通过使用以流动相为磷酸盐溶液和1wt％乙腈的组合、以及流动相为TFA与1wt％乙腈的组合分别对脱水达托霉素进行洗脱，可有效改善C18填料的保留能力的同时，避免脱水达托霉素在纯化过程中发生进一步降解，以提高最终产品脱水达托霉素冻干粉的纯度至99％。

附图说明

图1所示为本发明在具体实施方式中纳滤后收集液C的液相图谱；

图2所示为本发明在具体实施方式中达托霉素料液的液相图谱。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。

一种脱水达托霉素的分离纯化方法，包括如下步骤：

S1、对达托霉素料液在55～60℃、加热时间大于10h条件下进行破坏性实验，获得料液A；