[发明专利]一种视网膜前体细胞的筛选和培养方法在审
| 申请号： | 202111232182.1 | 申请日： | 2021-10-22 |
| 公开（公告）号： | CN113943707A | 公开（公告）日： | 2022-01-18 |
| 发明（设计）人： | 曾玉晓;邹婷;徐海伟;段平 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院 |
| 主分类号： | C12N5/0797 | 分类号： | C12N5/0797 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 400038 重*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 视网膜 体细胞 筛选 培养 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种视网膜前体细胞的筛选和培养方法，其特征在于，所述方法为：
(1)取视网膜类器官并分离视网膜神经层，将视网膜神经层放入改良消化液中37℃消化30分钟，在消化15分钟后将未消化散的神经层更换另一管新鲜改良消化液，摇晃、轻轻吹打，贴壁培养2天；
(2)取出步骤(1)中贴壁培养细胞，只加入TrypLE消化酶3-5分钟，收集细胞；
(3)将步骤(2)中收集的细胞用改良N2B27神经干细胞培养基培养。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述改良消化液为TrypLE消化酶中含有0.125％胰蛋白酶。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述改良N2B27神经干细胞培养基包括D/F12D/F12基础培养基、Neurobasal培养基、B27添加剂、N2添加剂、BFGF和血清替代物。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述D/F12D/F12基础培养基和Neurobasal培养基的体积比为1：1。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述B27添加剂的质量分数为2％、N2添加剂的质量分数为1％。
6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述改良N2B27神经干细胞培养基中BFGF的终浓度为20ng/mL。
7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，血清替代物的质量分数为3％。
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