[发明专利]抗原与碱性磷酸酶结合物的制备方法在审
| 申请号： | 202111229485.8 | 申请日： | 2021-10-21 |
| 公开（公告）号： | CN114137203A | 公开（公告）日： | 2022-03-04 |
| 发明（设计）人： | 黄诗铭;吴晗琪;王保升 | 申请（专利权）人： | 广州万孚生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/535 | 分类号： | G01N33/535 |
| 代理公司： | 广州广典知识产权代理事务所(普通合伙) 44365 | 代理人： | 曾银凤 |
| 地址： | 510663 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抗原 碱性磷酸酶 结合 制备 方法 | ||
1.一种抗原与碱性磷酸酶结合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)室温下，采用4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯对碱性磷酸酶进行活化，得到活化的碱性磷酸酶；
(2)室温下，3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯与抗原蛋白反应，再加入还原剂还原，得到含游离巯基的抗原蛋白；
(3)室温下，将步骤(1)所述活化的碱性磷酸酶和步骤(2)所述含游离巯基的抗原蛋白反应，然后加入N-乙基马来酰亚胺反应，再加入乙醇胺反应，得到抗原与碱性磷酸酶结合物；
步骤(3)中，所述含游离巯基的抗原蛋白与所述活化的碱性磷酸酶的质量比为1：(0.8-4)；所述含游离巯基的抗原蛋白与N-乙基马来酰亚胺的摩尔比为1：(5-20)，所述N-乙基马来酰亚胺与乙醇胺的摩尔比为1：(1-5)；所述加入N-乙基马来酰亚胺反应的反应时间为(15-38)min，所述加入乙醇胺反应的反应时间为(15-38)min。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述加入N-乙基马来酰亚胺反应的反应时间为(30-38)min；所述加入乙醇胺反应的反应时间为(30-38)min。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述含游离巯基的抗原蛋白与所述活化的碱性磷酸酶的质量比为1：(0.8-1.2)。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述活化的碱性磷酸酶和所述含游离巯基的抗原蛋白在室温下反应的反应时间为(30-125)min。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯和碱性磷酸酶的摩尔比为(5-22):1。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯与抗原蛋白反应的反应时间为(30-125)min。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯与抗原蛋白的摩尔比为(4-20)：1。
8.根据权利要求1-7任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述活化的时间为(30-120)min；和/或，步骤(2)所述加入还原剂还原的时间为(20-120)min。
9.根据权利要求1-7任一项所述的制备方法，其特征在于，所述抗原蛋白为乙肝表面抗原；和/或，步骤(2)所述还原剂为二硫苏糖醇。
10.权利要求1-9任一项所述的制备方法制备的抗原与碱性磷酸酶结合物。
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