[发明专利]一种鹿花菌素的检测方法

说明书

本发明涉及一种鹿花菌素的检测方法及试剂盒，属于分析检测技术领域。本发明首先将鹿花菌素水解为甲基肼，然后采用对甲基苯甲醛对鹿花菌素水解产物进行衍生化，并使用氘代对甲基苯甲醛与甲基肼的反应产物作为内标，通过液相色谱串联质谱法对待测液进行分析。本发明衍生化反应速度快，所需时间短，效率远高于现有检测方法，并且衍生化产物的色谱峰峰形及分离度能够得到有效改善和提高，明显提高了方法的准确度和灵敏度，通过内标法消除样品基质产生的基质效应，满足了准确定量的需求，提高检测结果的准确性。

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，特别是涉及一种鹿花菌素的检测方法及试剂盒。

背景技术

近年来因误食毒蘑菇引发的中毒事件在我国呈蔓延趋势，引起社会广泛关注，也成为食品安全领域极为突出的问题。2020年国家食品安全风险评估中心基于我国食源性疾病暴发监测系统的数据统计发现，2003～2017年间31.8％的食源性中毒事件由毒蘑菇中毒引起，位居各类食源性中毒诱发因素之首。目前已鉴定出的蘑菇毒素有100 多种，我国仅对鹅膏肽类等少数几种蘑菇毒素建立了相关的检测方法，对于大多数的蘑菇毒素尚无任何检测方法。鹿花菌(Gyromitra esculenta)是假羊肚菌的一种，其外观与可食用羊肚菌极其相似，普通人很难通过肉眼辨识，故常被误食而产生中毒。鹿花菌的主要毒性成分为鹿花菌素(Gyromitrin)，其可影响神经递质γ-氨基丁酸的生成，中毒症状一般与消化道及神经系统有关，中毒初始阶段表现为反胃、呕吐、腹泻及便血，后期会出现严重的神经系统问题，严重可导致死亡。鉴于我国鹿花菌中毒事件频发的现状，开发可靠有效的鹿花菌素检测方法，对鹿花菌中毒溯源及毒蘑菇鉴定具有重要意义。

由于鹿花菌素的化学结构特性，其在质谱上难以离子化且无明显光学特性，直接检测鹿花菌素的难度极大。目前国内外对鹿花菌素的检测技术研究十分匮乏，仅有1项研究报道了鹿花菌素的检测方法。流程包括：首先将鹿花菌素水解为甲基肼，再用五氟苯甲酰氯对甲基肼进行衍生化，最后利用气相色谱串联质谱法进行检测(Journal ofChromatographyA,2006，1125，229–233)。该方法中鹿花菌素水解为甲基肼需要2h，衍生化时间为1h，然后还需净化处理，用气相色谱串联质谱法进行检测需30min，整个检测时间约4.5h，对鹿花菌干品的检出限为300μg/kg。该方法操作繁琐且耗时，检测灵敏度偏低，限制了该技术的应用与推广。此外，该方法没有选择样品基质效应对定量结果的影响，难以满足准确定量的需求。鉴于此，开发一种操作简单且定量准确的鹿花菌素检测方法是亟需解决的技术难点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鹿花菌素的检测方法及试剂盒，通过内标法消除了基质效应，具有操作简单、样品通量高、灵敏度高、检测准确度高的优点。

为解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种鹿花菌素的检测方法，所述方法包括以下步骤：

将待测样本与提取溶剂混合提取后所得的提取液进行离心，收集上清液；

将所述上清液用乙醇和盐酸酸解，得到鹿花菌素水解液；将所述鹿花菌素水解液与对甲基苯甲醛混合进行衍生化反应，得到待测样本的衍生化产物；通过液相色谱串联质谱法对衍生化产物进行检测分析，计算得到所述待测样本中鹿花菌素的含量。

优选的，所述待测样本包括蘑菇、尿液或血浆。

优选的，当所述待测样本为蘑菇时，所述提取溶剂为乙腈溶液或甲醇溶液；所述待测样本为尿液或血浆时，所述提取溶剂为乙腈。

优选的，所述乙醇的质量百分浓度为30％～70％，所述盐酸的浓度为3～5mol/L。

优选的，所述酸解的温度为40～60℃，所述酸解的时间为 40～80min。

优选的，所述鹿花菌素水解液与对甲基苯甲醛的体积比为1： 1～2。