[发明专利]一种提高植物分枝能力的方法、序列及果苗木繁育方法

说明书

本发明属于植物基因工程技术领域，公开了一种提高植物分枝能力的方法、序列及果苗木繁育方法，所述提高植物分枝能力的方法具体包括：利用CBF‑L基因的上游引物和下游引物对CBF‑L基因进行单克隆扩增，得到扩增产物；利用克隆所得基因进行超表达载体的构建；将植物超表达载体转入至“GALA‑3”植株中。本发明从苹果中克隆并鉴定出CBF全长基因，其中CBF‑L基因的CDS序列如序列表SEQ ID NO:1所示；所选的植物优选为苹果。本发明实施为验证CBF‑L在苹果分枝中的作用，以转基因形式在“GALA‑3”植株中进行超表达，有效调控苹果分枝。

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，尤其涉及一种提高植物分枝能力的方法、序列及果苗木繁育方法。

背景技术

植物分枝是影响植物株型形成的重要因素，并对植物生物学特征及农业生产有着重要影响。植物生长过程中，腋芽和顶芽是由芽原基发育而来的，顶芽是茎的发育初期便一次性完成的，主要与植株的主干发育有关，而腋芽是从叶腋中所生出的定芽，常见于种子植物中，主要是与植物的分枝有关，顶芽与腋芽的形成与发育共同调控植株地上部分的生长与植物构型的形成。在植物腋芽形成与分枝发育阶段也会受到许多因素的影响，茎尖会以顶端优势的方式抑制腋芽的形成，进而影响茎的分枝。植物会受到自身激素(生长素、独脚金内酯和细胞分裂素)调节、养分分配和环境因子的影响，被众多复杂信号所调节，以此来调控腋芽的生长并影响植物新的分枝的形成，保证植物正常的生命活动。

植物分枝是影响植物株型的关键因素，不仅对植物适应环境非常重要，也影响农作物和园艺作物的栽培方式和产量。尤其在果树领域，植物的分枝高度、分枝数目、分枝长度、分枝角度以及分布方式对于果树的早期树形形成、果树的栽培管理、果树产量意义重大。侧枝的发生源于腋生分生组织的萌发，腋芽萌发后可以保持原品种的优良性状，这无疑在苹果苗木繁育和良种推广方面起到了巨大作用。但侧枝形成的具体机制在很大程度上尚不清楚，其作用机理尚待研究。CBF转录因子是AP2/ERF家族中一类重要的转录因子。在植物的进化历程中，CBF转录因子的结构域具有高度保守的PKKRAGRKKFRETRHP氨基酸序列，且能够调控与分枝表型的有关的下游基因的表达，进而参与到植物的生命活动进程中。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：在苹果苗木繁育和良种推广方面培育果树新品种时间长，无法实现短时间内提高植物的产量与品质。

解决以上问题及缺陷的难度为：基因的构建步骤繁多，苹果农杆菌转化叶片侵染的成活率较低。

解决以上问题及缺陷的意义为：转基因植株转入之后驯化困难，应用于田间还需一定的时间。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种提高植物分枝能力的方法、序列及果苗木繁育方法。

本发明是这样实现的，一种提高植物分枝能力的方法，所述提高植物分枝能力的方法使用CBF-L基因。

进一步，所述提高植物分枝能力的方法具体包括：

第一步，利用CBF-L基因的上游引物和下游引物对CBF-L基因进行单克隆扩增，得到扩增产物；

第二步，利用克隆所得基因进行超表达载体的构建；

第三步，将植物超表达载体转入至“GALA-3”植株中。

进一步，所述第一步的CBF-L基因的单克隆扩增具体包括：

(1)PCR扩增CBF-L基因：以上游引物F和下游引物R为引物对，用如下表1中的40微升体系对CBF-L基因进行单克隆扩增，得到CBF-L核苷酸双链；其中，CBF-L基因的CDS序列SEQIDNO:1；上游引物F的核苷酸序列SE QIDNO:2；下游引物R的核苷酸序列SEQIDNO:3；