[发明专利]一种提高植物分枝能力的方法、序列及果苗木繁育方法

权利要求书

1.一种提高植物分枝能力的方法，其特征在于，所述提高植物分枝能力的方法使用CBF-L基因。

2.如权利要求1所述的提高植物分枝能力的方法，其特征在于，所述提高植物分枝能力的方法具体包括：

第一步，利用CBF-L基因的上游引物和下游引物对CBF-L基因进行单克隆扩增，得到扩增产物；

第二步，利用克隆所得基因进行超表达载体的构建；

第三步，将植物超表达载体转入至“GALA-3”植株中。

3.如权利要求2所述的提高植物分枝能力的方法，其特征在于，所述第一步的CBF-L基因的单克隆扩增具体包括：

(1)PCR扩增CBF-L基因：以上游引物F和下游引物R为引物对，用如下表1中的40微升体系对CBF-L基因进行单克隆扩增，得到CBF-L核苷酸双链；其中，CBF-L基因的CDS序列SEQ IDNO:1；上游引物F的核苷酸序列SE Q ID NO:2；下游引物R的核苷酸序列SEQ ID NO:3；

(2)将PCR扩增得到的CBF-L核苷酸双链用10微升体系进行连接PMD-19-T(Simple)载体，在16℃下过夜连接，得到连接产物；

(3)连接产物转化感受态细胞：

将从-80℃超低温冰箱取出大肠杆菌DH5α感受态细胞，置于冰上融化，吸取20微升的DH5α感受态细胞于1.5mL无菌的的离心管中，加入10微升连接产物，吹打混匀，冰浴30min，42℃水浴热激90s，再冰浴2min，在无菌环境中加入200微升的LB液体培养基，置于37℃、转速为180rpm的摇床中，摇菌1h，30min后将将超净工作台打开进行灭菌，在15min后，开始烧涂布器，一般烧2-3分钟，放到超净工作台上等待至室温；摇菌结束后，取100微升菌液涂LB板，开始涂板，涂板至板子变干为止，盖上盖子封口做好标记，放到37℃恒温培养箱中培养10～12h，待长出菌斑；

(4)挑斑：在无菌超净台中，用无菌的枪头吸取100微升LB液体培养基，打入0.5mL的无菌离心管中，用10微升的无菌枪头挑取10个上述菌斑，置于LB液体培养基中，吹打几次，盖上盖子，在离心管上做好标记，放入摇床中，37℃，180rpm，4-6h，得到菌液；

(5)菌液鉴定：摇菌结束后用10微升体系进行PCR鉴定，以上述菌液为模板，选用的上游引物为载体的序列，选用的下游引物为基因的下游引物，按照正常的菌批验证流程进行鉴定，以水为阴性对照；跑一个小孔胶，检验菌液的阳性率，挑选阳性鉴定中比较明亮的菌液。