[发明专利]一种检测灵芝属真菌中性三萜的方法

说明书

本发明提供了一种检测灵芝属真菌中性三萜的方法，该方法包括如下步骤：(1)灵芝子实体的预处理步骤；(2)超高效液相色谱检测步骤；(3)化合物质谱信息获得步骤；(4)超高效液相色谱‑三重四级杆质谱联用分析方法建立步骤；(5)数据分析步骤。本发明提供的同时检测灵芝属真菌中12个中性三萜化合物的方法，实现了对灵芝属真菌中12个中性三萜化合物的同时定性定量分析，为灵芝属真菌的相关研究提供精确可靠的检测分析。

技术领域

本发明涉及食品药品分析领域，具体的说涉及一种检测灵芝属真菌中性三萜的方法。

背景技术

灵芝属(Ganoderma P.Karst)隶属于担子菌门(Basidiomycota)，伞菌纲(Agaricomycetes)，多孔菌目(Polyporales)，灵芝科(Ganodermataceae)，是高等担子菌的一个重要类群,共有137个种。其中，赤芝(Ganoderma lucidum)和紫芝(Ganodermasinense)被中国药典规定可以作为药材使用，赤芝、紫芝和松杉灵芝(Ganoderma tsugae)一起，可以作为保健食品开发的原料。灵芝属真菌中含有种类丰富的三萜化合物，是其主要活性成分之一，具有多种生理活性。这些三萜化合物，可以通过酸碱萃取的方式分成两类，即酸性三萜和中性三萜。酸性三萜主要为灵芝酸、灵芝烯酸和赤芝酸类化合物，例如灵芝酸Ganoderic acid A、B、C2、D、E、F，灵芝烯酸Ganoderenic acid A、B、D，赤芝酸lucidenicacid A、B等，这类物质结构较为一致，大多是在C11位存在一个羰基且都都存在着△8(9)双键，其紫外吸收集中在253nm左右，因此比较适合用高效液相-紫外联用进行定量分析。中性三萜则种类多样，有灵芝酮，灵芝醛，灵芝醇、灵芝酯、灵芝内酯等多种类化合物，例如Ganodermanontriol、Ganoderol B、Ganoderone A、Ganoderal A、Ganoderol A、Lucialdehyde A等。中性三萜中也会含有一些极性较弱的的灵芝酸化合物，例如7-Oxo-ganoderic acid Z、23S-hydroxy-11,15-dioxo-ganoderic acid DM等。据报道，中性三萜在灵芝属很多种中均有发现，例如白肉灵芝(Ganoderma leucocontextum)、无柄灵芝(Ganoderma resinaceum)、紫芝、松杉灵芝等，是一类普遍存在的三萜类物质。

中性三萜作为灵芝三萜的重要组成部分，其在抗肿瘤、抗病毒、抗炎、保肝、降血糖、降血脂等具有多方面也具有较大的潜力。由于中性三萜结构比较复杂多样，各化合物的最大紫外吸收不一致，很难通过紫外吸收进行精准的检测，因此，一直以来，尚未有较为全面的中性三萜检测方法。而由于中性三萜检测方法的匮乏，在对灵芝及其相关产品进行质量评价时，其结果往往不够全面客观，极大的阻碍了灵芝三萜的研究和开发。

中性三萜是一类弱极性三萜，可以采用大气压化学电离使其发生离子化，因此可以通过使用质谱对其进行检测。因此，有必要建立一种精准分析方法，对灵芝属真菌子实体、提取物或相关产品中的中性三萜化合物进行测定。

发明内容

本发明提供了一种检测灵芝属真菌中性三萜的方法，该方法包括如下步骤：

(1)灵芝子实体的预处理步骤：将灵芝子实体样品加入有机溶剂进行提取，取上清液，过滤，稀释，得到待测样品溶液；配制12个中性三萜化合物的混合标准品溶液；

(2)超高效液相色谱检测步骤：对待测样品溶液和12个中性三萜化合物的混合标准品溶液进行超高效液相色谱分离，以获得较好的分离度；

(3)化合物质谱信息获得步骤：利用质谱优化软件(Agilent Optimizer)，对12个三萜化合物进行母离子扫描、子离子对的检出以及最佳碰撞能的寻找；