[发明专利]富集病毒的微马达的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了富集病毒的微马达的制备方法及其应用。本发明所提供的富集病毒的微马达的制备方法，包括如下步骤：(1)将羧甲基壳聚糖与海藻酸钠混合水溶，制备得到羧甲基壳聚糖和海藻酸钠的混合溶液A；(2)向步骤(1)的羧甲基壳聚糖和海藻酸钠的混合溶液A中加入Fesubgt;3/subgt;Osubgt;4/subgt;@Ag纳米粒子，并超声混合，得到混合溶液B；(3)将步骤(2)得到的混合溶液B作为水项，biorad液滴生成油作为油项，在T形微流控芯片中产生油包水液滴；(4)将所述步骤(3)得到的油包水液滴与氯化钙和戊二醛进行交联反应，即得到微马达。本发明制备得到的微马达上可携带生物素化的抗体并进行病毒的特异性富集。

技术领域

本发明涉及病毒富集技术领域，特别地涉及富集病毒的微马达的制备方法及其应用。

背景技术

新冠肺炎在2020年成为了危害全球的超级病毒，严重影响各国人民的健康和各个国家的经济发展，研发出快速准确的新冠肺炎病毒检测方法就显得更为重要。目前，新冠病毒检测的方法主要通过咽试纸进行上呼吸道病毒检测，为提高检测速率，实现大规模检测，需要将多个样本合并检测。因此，提高病毒的富集效率对于样本检测的准确率尤为重要。

目前富集病毒的方法有聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)沉淀法、超速离心法、超滤法和免疫磁珠分离法。

基于PEG可在中性高离子强度的缓冲液中使病毒沉淀的原理，PEG沉淀法被广泛用于从洗脱液中富集病毒。PEG沉淀法操作简单，只需将洗脱液的pH调至中性，并提高其离子强度，加入PEG后于4℃静置过夜，即可将病毒沉淀。PEG沉淀法成本低廉、易于操作，已被广泛用于从洗脱液中沉淀病毒，但是一般需要沉降，耗费时间较长，而且需要高速离心机等大型设备。

超速离心法浓缩病毒是通过60,000r/min以上的转速来获得约为重力加速度50万倍的离心力，从而达到浓缩病毒的目的。其原理是利用每个颗粒都有不同的质量、密度、大小及形状等，使其在条件相同的离心场中有不同的沉降速度，由此便可以实现物质之间的分离，达到浓缩效果。超速离心机价格较高，而且要求样品的体积很小，一般用作二次浓缩。

免疫磁珠分离法的原理是利用抗体和抗原特异性结合，把抗体包裹在磁珠表面，并将其装填成柱，水样通过柱子与其中的免疫磁珠充分接触后，最后再用洗脱液洗脱病毒，这样就可以分离出被检测病毒。使用磁珠法由于需要被动的磁棒多次搅动来驱动磁珠，提高富集效率，因而很难实现设备小型化。

发明内容

为了弥补以上领域的不足，本发明的主要目的是提供一种富集病毒的微马达的制备方法。

本发明所提供的富集病毒的微马达的制备方法，包括如下步骤：

(1)将羧甲基壳聚糖与海藻酸钠混合水溶，制备得到羧甲基壳聚糖和海藻酸钠的混合溶液A；

(2)向步骤(1)的羧甲基壳聚糖和海藻酸钠的混合溶液A中加入Fe₃O₄@Ag纳米粒子，并超声混合，得到混合溶液B；

(3)将步骤(2)得到的混合溶液B作为水项，biorad液滴生成油作为油项，在T形微流控芯片中产生油包水液滴；

(4)将所述步骤(3)得到的油包水液滴与氯化钙和戊二醛进行交联反应，即得到微马达。

进一步，在所述步骤(4)得到微马达后，还包括用1H,1H,2H,2H-全氟-1-辛醇和无水乙醇的混合溶液超声清洗所述微马达的步骤。

优选地，所述混合溶液中1H,1H,2H,2H-全氟-1-辛醇的质量百分比浓度为50％；无水乙醇的质量百分比浓度为50％。

使用质量百分比浓度为50％1H,1H,2H,2H-全氟-1-辛醇和50％无水乙醇的混合溶液可以有效的将上述混合溶液中的biorad生成油和未参与反应的戊二醛萃取出来，从而实现微马达的清洗。