[发明专利]一种可促进血管再生的柔性定向纳米纤维复合膜的制备方法

权利要求书

1.一种促进血管再生的柔性定向纳米纤维复合膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）在去离子水中加入碳酸钠，调节pH为7~10，然后按50-200g/L的比例加入明胶，加热并持续搅拌，使明胶充分溶解，加入甲基丙烯酸酐，甲基丙烯酸酐与明胶体积质量比为1:1~3:1，在40~50℃条件下，持续搅拌1~8小时，在常温下进行透析，透析完成后，冷冻干燥后获得甲基丙烯酸酰化明胶；

（2）按50~200g/L的比例将甲基丙烯酸酰化明胶加入去离子水中，混合后按丁二酸酐与甲基丙烯酸酰化明胶的体积质量比为1:1~3:1的比例加入丁二酸酐，加热并持续搅拌，待反应完全，在常温下进行透析，透析完成后冷冻干燥后得到改性甲基丙烯酸酰化明胶-COOH；

（3）按50~200g/L的比例将改性甲基丙烯酸酰化明胶-COOH溶于磷酸盐缓冲盐溶液中，按0.1~0.5g/L的比例加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的混合物；活化并持续轻柔搅拌，然后按0.1~0.4g/L的比例加入血管内皮生长因子，混合搅拌6~24小时，在常温下进行透析，透析完成后冷冻干燥得到以共价接枝的甲基丙烯酸酰化明胶-血管内皮生长因子；

（4）按5~20g/L的比例在避光条件下将苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基亚磷酸锂与磷酸盐缓冲盐溶液混合，于50℃条件下磁力搅拌1~8小时，配置成苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基亚磷酸锂溶液，按50~200g/L的比例将甲基丙烯酸酰化明胶-血管内皮生长因子加入到苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基亚磷酸锂溶液中，于50℃下磁力搅拌1~8小时，搅拌均匀得到甲基丙烯酸酰化明胶-血管内皮生长因子水凝胶；

（5）按50~70g/L的比例将聚己内酯和明胶溶于六氟异丙醇溶液中，于40℃条件下快速搅拌，其中，聚己内酯和明胶的质量比为1:1~2:1，运用静电纺丝方法制得聚己内酯-明胶柔性定向纳米纤维膜，用磷酸盐缓冲盐溶液冲洗，自然干燥后备用；

（6）取步骤（4）得到的甲基丙烯酸酰化明胶-血管内皮生长因子水凝胶平铺至聚己内酯-明胶柔性定向纳米纤维膜上，在蓝光照射下原位光交联固化，真空干燥后即制成柔性定向纳米纤维复合膜。

2.根据权利要求1所述促进血管再生的柔性定向纳米纤维复合膜的制备方法，其特征在于：步骤（1）~（3）所述透析的条件为：在常温条件下透析5~10天，每12小时换一次去离子水，透析期间缓慢轻柔搅拌。

3.根据权利要求1所述促进血管再生的柔性定向纳米纤维复合膜的制备方法，其特征在于：步骤（3）中1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺与N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1:1~1:3。

4.根据权利要求1所述促进血管再生的柔性定向纳米纤维复合膜的制备方法，其特征在于：步骤（5）中静电纺丝的条件为：溶液流速为0.5~2ml/h，电压为10~20KV，高速滚筒收集器转速为2000~3000rpm使纤维定向排列，将环境湿度控制在30%，收集器与喷丝头之间的距离为15~20cm。

5.根据权利要求1所述促进血管再生的柔性定向纳米纤维复合膜的制备方法，其特征在于：步骤（6）中蓝光的波长为405~465nm。