[发明专利]一种养生酒对幽门螺旋杆菌抑制作用有效性的验证方法

说明书

本发明公开了一种养生酒对幽门螺旋杆菌抑制作用有效性的验证方法，具体包括如下步骤：准备幽门螺杆菌菌株和实验小鼠；将实验小鼠进行分组；进行细菌培和动物造模；给分组后的小鼠给药；进行模型检测和模型复制评价；对小鼠进行体征观察；解剖小鼠并对小鼠的胃部大体形态学观察、胃窦部粘膜组织尿素酶检测、胃组织病理学HE染色和肝组织病理学HE染色；根据体征观察结果、胃部大体形态学观察结果、胃窦部粘膜组织尿素酶检测结果、胃组织病理学HE染色后观察结果和肝组织病理学HE染色后观察结果判断养生酒对幽门螺旋杆菌抑制作用有效性。本验证方法可以科学、有效、全面的校验养生酒对幽门螺旋杆菌抑制效果。

技术领域

本发明属于细菌抑制技术领域，具体涉及一种养生酒对幽门螺旋杆菌抑制作用有效性的验证方法。

背景技术

幽门螺旋杆菌是革兰氏阴性、微需氧的细菌，生存于胃部及十二指肠的各区域内。它会引起胃黏膜轻微的慢性发炎，甚或导致胃及十二指肠溃疡与胃癌。生活中适量酒精度数的酒对细菌有一定的抑制作用，而高浓度的酒精更被医学上用作消毒使用。现有的许多酒品厂家宣传其养生酒对幽门螺旋杆菌有抑制作用，但大多未被科学的验证。因此，需要一种验证方法来验证酒对幽门螺旋杆菌抑制作用有效性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种养生酒对幽门螺旋杆菌抑制作用有效性的验证方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种养生酒对幽门螺旋杆菌抑制作用有效性的验证方法，具体包括如下步骤：

(1)、准备充足的幽门螺杆菌国际标准菌株，准备实验小鼠70只，18～22g，雌雄各半；

(2)、分组：将所有小鼠随机分为7组，即空白对照组、模型对照组、阳性药物组、养生酒高剂量组、养生酒低剂量组及普通白酒高剂量组、普通白酒低剂量组，每组10只，再将实验小鼠先适应性喂养一周；

(3)、细菌培养：将幽门螺杆菌菌株在超净工作台中以每个平板100ul菌悬液的量划线接种于哥伦比亚血琼脂平板上，待菌液在培养基上吸干后，将培养基倒置放于厌氧培养袋中，而后迅速将微需氧产气包放入培养袋中并密封，置于37℃恒温培养箱中培养48～72h；待细菌长满平板，挑取典型菌落进行幽门螺杆菌菌株试纸鉴定，试纸颜色由黄变紫后，用生理盐水轻轻洗下菌落，测量菌液OD值；

(4)、动物造模：采用培养并收集的幽门螺杆菌菌株，菌悬液浓度用生理盐水调节为1×10⁹CFU/ml；造模前将小鼠禁食不禁水24h，除空白组外均先灌胃5％碳酸氢钠0.2ml/只，30min后再灌胃给予幽门螺杆菌菌液0.2ml/只/次，灌胃后再禁食禁水3h，之后正常摄食饮水；隔天感染一次，共8次；空白对照组给予等量生理盐水；

(5)、给药：造模结束后开始给药，给阳性药物组喂食阳性药物，养生酒高剂量组喂食49.4ml/kg的养生酒，养生酒低剂量组喂食24.7ml/kg的养生酒，普通白酒高剂量组喂食与养生酒同度数的普通白酒49.4ml/kg，普通白酒低剂量组喂食与养生酒同度数的普通白酒24.7ml/kg，其中均以0.2ml/10g/只灌胃给药，空白组及模型组灌胃给予等量生理盐水，每天一次，连续给药20天；给药期间各组自由饮水，正常进食；

(6)、模型检测：末次灌胃菌液2h后脱颈处死小鼠，快速完整取胃，观察胃部形态变化；将胃沿胃大弯剪开，展平于手术台上，小心刮取胃黏膜组织进行尿素酶试纸检测；

(7)、模型复制评价：若模型小鼠尿素酶试纸检测试纸由黄变紫，结果呈显阳性；空白组小鼠试纸检测呈阴性，空白小鼠胃红润光泽，整体完整无变形，；而模型组小鼠，胃外部呈现深紫色，表面皱缩、凹凸不平，出现明显病变；将胃沿胃大弯展开后，可见模型组出现点星状出血，可判断模型复制成功；

(8)、体征观察：实验过程中，各组小鼠均常规饲养，正常进食饮水，期间定期观察实验动物体征情况；