[发明专利]一种采用HPLC测定3-丁基-1（3H）-异苯并呋喃酮有关物质的检测方法

说明书

本发明提供了一种采用高效液相色谱法(HPLC)测定3‑丁基‑1(3H)‑异苯并呋喃酮有关物质的检测方法，该方法采用苯基色谱柱，检测波长226nm‑230nm，流速为0.8mL/min‑1.2mL/min，柱温为25℃‑35℃，流动相由A相和B相组成，A相为甲醇与乙腈体积比为50/50‑40/60的混合溶液加入0.01％‑0.05％的醋酸，B相为0.03％‑0.07％醋酸水溶液。本发明提供的检测方法的专属性、灵敏度、各吸收峰的分离度、准确度和稳定性均较好。

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种3-丁基-1(3H)-异苯并呋喃酮原料药或其制剂有关物质的高效液相色谱(HPLC)检测方法。

背景技术

3-丁基-1(3H)-异苯并呋喃酮是我国自主研究和开发的用于治疗轻、中度急性缺血性脑卒中的药物。近年来，随着科学技术的逐步发展，人们对于药品的风险认识越来越深入，对风险管控意识越来越强烈，国内外药品审评审批机构对药物的安全性要求逐渐提高，因此充分认识到药品的风险并采取有效手段控制风险是目前药品研发和生产的关键。3-丁基-1(3H)-异苯并呋喃酮在生产和贮存过程中应首先管控的风险就是杂质，包括工艺杂质和降解杂质，所以开发一个适用于检测和控制3-丁基-1(3H)-异苯并呋喃酮杂质的有效的分析方法对控制产品质量，保证产品安全至关重要。

该类化合物不稳定，易受光照、温度、酸、碱等因素的影响而发生变化和相互转化，其具有副产物多、稳定性差的特点。3-丁基-1(3H)-异苯并呋喃酮的主要工艺杂质与其主结构相似，化学性质相近，在分离和检测上存在一定的难度。目前已报道的专利和文献中，仅研究了部分杂质，如起始物料、中间体、碱性降解杂质、氧化杂质、以及起始物料引入的部分杂质，而2-丙基-3-羟基-1-茚酮、3-丁基异吲哚啉-1-酮和邻戊烷基苯甲酸是生产过程极易产生的降解杂质，在后续精制中很难去除，而导致残留至成品中的风险较高，3-异丙基-1(3H)-异苯并呋喃酮3-丙基-1(3H)-异苯并呋喃酮是起始物料中杂质，在生产过程中会发生副反应引入至成品中，这些杂质均是3-丁基-1(3H)-异苯并呋喃酮生产过程中较难控制且不易去除的杂质，应保证在成品中的有效检出，控制产品质量。而本发明人在对现有技术的调研中，并未发现现有技术中提及这几个杂质，这可能是由于在研究时未对产品中的杂质进行定性，未追踪到其来源，没有进行控制，且缺乏分离这些杂质的有效的分离方法。

例如，中国专利申请CN201610395891.4公开了一种同时测定其有关物质的方法。该方法解决了邻苯二甲酸、中间体I[2-(α-羰基戊基)苯甲酸]、中间体II[2-(α-羟基戊基)苯甲酸钠]、3-丙基-1(3H)-异苯并呋喃酮、3-亚丁基-1(3H)-异苯并呋喃酮、双丁基苯酞杂质与主成分难以分离的问题，但是该专利申请中所述的检测方法不包含对2-苯并呋喃酮和3-正丁基-3-羟基-1(3H)-异苯并呋喃酮的分离，无法对2-苯并呋喃酮、3-正丁基-3-羟基-1(3H)-异苯并呋喃酮以及其他衍生物杂质实现分离测定。中国专利申请CN201910466352.9公开了一种有关物质的方法。该方法解决了现有技术中无法分离2-苯并呋喃酮和3-正丁基-3-羟基-1(3H)-异苯并呋喃酮的问题，同时增加验证了对杂质邻羧基苯甲醇、邻羧基苯甲醛、3-甲基-1(3H)-异苯并呋喃酮、3-乙基-1(3H)-异苯并呋喃酮、3-戊基-1(3H)-异苯并呋喃酮、3-异丁基-1(3H)-异苯并呋喃酮、3-仲丁基-1(3H)-异苯并呋喃酮、3-叔丁基-1(3H)-异苯并呋喃酮、3-正丁基-3-羟基-1(3H)-异苯并呋喃酮、3-丁基-1(3H)-异苯并呋喃酮之间的分离有良好的效果。但是，该专利申请中并未涵盖生产中的关键工艺杂质2-丙基-3-羟基-1-茚酮、邻戊烷基苯甲酸、3-丁基异吲哚啉-1-酮和3-异丙基-1(3H)-异苯并呋喃酮3-丙基-1(3H)-异苯并呋喃酮。并且，本发明人采用该专利申请的方法对以上这些杂质进行了考察，发现该方法对于分离3-异丙基-1(3H)-异苯并呋喃酮3-丙基-1(3H)-异苯并呋喃酮与3-丁基异吲哚啉-1-酮、3-异丁基-1(3H)-异苯并呋喃酮与3-丁基-1(3H)-异苯并呋喃酮的效果较差，分离度分别为0.65和1.38，不能达到杂质准确检测及质量控制的要求(具体结果见下文的对比例1)。