[发明专利]治疗和/或预防非洲猪瘟病毒的疫苗及其制备方法

说明书

本发明提供了一种治疗和/或预防非洲猪瘟病毒的疫苗及其制备方法，涉及疫苗技术领域。本发明疫苗包括两种mRNA，核苷酸序列分别为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2；本发明将两种mRNA同时转染至293T细胞中时mRNA可以正确翻译形成P72蛋白，两种mRNA使用LNP包裹后递送至体内可以使机体产生免疫反应。

技术领域

本发明涉及疫苗技术领域，具体涉及一种治疗和/或预防非洲猪瘟病毒的疫苗及其制备方法。

背景技术

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的以高热、呼吸障碍和神经症状为主要特征的一种急性、烈性传染病。非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)是非洲猪瘟病毒科下唯一的种，是目前所发现的仅有的虫媒DNA病毒，主要依靠软体蜱科下钝缘蜱属的软壁虱进行传播。ASFV可感染不同年龄段的家猪和野猪，临床上最急性型和急性型ASF的死亡率高达100％，亚急性型的死亡率可降低30％～70％。ASFV的传播途径主要有直接接触感染动物或软蜱叮咬传播、也可通过污染过的泔水、饲料等食物传播、另外也能通过接触感染过的猪尸体或其产品进行传播。由于缺乏有效的手段对ASFV进行防控，ASFV每年给全球养殖业带来巨大的损失。

疫苗接种被认为是阻止非洲猪瘟病毒蔓延的有效手段。mRNA疫苗是继灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗和病毒载体疫苗后的第三代疫苗，具有针对病原体变异反应速度快、生产工艺简单、易规模化扩大等特点。但现在市场上暂无有效的疫苗可以有效预防ASFV。随着mRNA疫苗的发展，阳性纳米脂质颗粒的出现为mRNA疫苗递送提供了新的可能。非洲猪瘟病毒(ASFV)是一种双链DNA病毒，拥有复杂的结构。非洲猪瘟病毒的基因组由两层衣壳和两层外膜保护，衣壳主要由病毒编码蛋白p72构成，据以往试验数据估计，p72占病毒颗粒总重33％左右，同时p72是被病毒感染猪血液中能检测到的主要抗原。此前基于非洲猪瘟病毒p72蛋白的亚单位疫苗研究已有很多尝试，但没有获得良好结果，分析前期相关研究失败原因可能是没有使用正确折叠的p72蛋白。由于非洲猪瘟病毒感染家猪致死率近100％，对家猪饲养产业乃至民生经济都有重大的威胁，且非洲猪瘟爆发后，国内多个单位虽然开展了非洲猪瘟疫苗研究，包括亚单位疫苗、多肽疫苗和基因缺失疫苗等，但截至目前尚无有效的疫苗问世。因此，目前亟需研发出一种有效的疫苗和防疫手段控制及预防非洲猪瘟病毒。

发明内容

本发明的目的在于提供一种治疗和/或预防非洲猪瘟病毒的疫苗及其制备方法，该疫苗通过将编码ASFV抗原的两种mRNA组合，使得基因编码的P72蛋白能够在表达后正确折叠，将该mRNA组合递送至体内后可以机体产生免疫反应。

为了实现上述技术方案，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一目的在于提供一种mRNA序列，所述mRNA的核苷酸序列包括SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2。

本发明所述核苷酸序列SEQ ID NO.1为编码ASFV P72全长蛋白的编码区序列优化得到；核苷酸序列SEQ ID NO.2选自ASFV CAP80蛋白的编码区，该编码区能够辅助P72蛋白正确折叠。

进一步地，所述mRNA还包括如下元件：5’-帽结构、3’-聚腺苷酸序列、5’UTR和3’UTR中的至少一种。

5’-帽结构要求为增加mRNA稳定性，避免mRNA被核酸外切酶降解；所述帽结构选自ARCA、m7G(5’)ppp中的一种，优选为m7G(5’)ppp；

所述3’-聚腺苷酸序列为50～200个A，优选为80～200个A。

5’UTR要求为调控mRNA翻译，所述5’UTR包括DNAH2 5’UTR和KOZAK序列；

优选地，所述DNAH2 5’UTR的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；KOZAK序列如SEQ IDNO.4所示；