[发明专利]治疗和/或预防非洲猪瘟病毒的疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种mRNA序列组合物，其特征在于，所述mRNA的核苷酸序列为两端含有5’-帽结构、3’-聚腺苷酸序列、5’UTR和3’UTR的元件的SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2。

2.根据权利要求1所述的mRNA序列组合物，其特征在于，所述5’-帽结构选自ARCA、m7G(5’)ppp中的一种；所述3’-聚腺苷酸序列为50~200个A。

3.根据权利要求1所述的mRNA序列组合物，其特征在于，所述5’-帽结构为m7G(5’)ppp；所述3’-聚腺苷酸序列为80~200个A。

4.根据权利要求1所述的mRNA序列组合物，其特征在于，所述5’UTR包括DNAH2 5’UTR和KOZAK序列。

5.根据权利要求4所述的mRNA序列组合物，其特征在于，所述DNAH2 5’UTR的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；KOZAK序列如SEQ ID NO.4所示；

3’UTR为血红蛋白HBA2，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

6.一种非洲猪瘟病毒mRNA疫苗试剂，其特征在于，包括如权利要求1~5任一项所述的mRNA序列组合物。

7.根据权利要求6所述的疫苗试剂，其特征在于，所述疫苗试剂包括脂质体，所述脂质体选自阳离子脂质体、非阳离子脂质体、阳离子脂质体纳米颗粒中的一种；

所述阳离子脂质体纳米颗粒与mRNA的质量比为3:1~10:1。

8.根据权利要求7所述的疫苗试剂，其特征在于，所述阳离子脂质体纳米颗粒的组分包括可电离脂质、胆固醇、辅助脂质、聚乙二醇中的至少一种。

9.根据权利要求8所述的疫苗试剂，其特征在于，所述阳离子脂质体纳米颗粒的组分包括可电离脂质45~55份、胆固醇25~35份、辅助脂质15~25份、聚乙二醇0.5~2份。

10.根据权利要求8所述的疫苗试剂，其特征在于，所述可电离脂质为DLin-MC3-DMA；所述辅助脂质为DSPC。

11.根据权利要求6所述的疫苗试剂，其特征在于，所述疫苗试剂还包括佐剂；所述佐剂选自核酸、蛋白、脂多糖和小分子化合物中的至少一种。

12.根据权利要求11所述的疫苗试剂，其特征在于，所述佐剂为鱼精蛋白；所述鱼精蛋白的用量为mRNA用量的0.01~0.1%。

13.权利要求6~12任一项所述疫苗试剂的制备方法，其特征在于，包括将mRNA与阳离子脂质纳米颗粒混合，得到所述疫苗。

14.根据权利要求13所述疫苗试剂的制备方法，其特征在于，包括：

（1）将可电离脂质、胆固醇、辅助脂质、聚乙二醇溶于有机溶液，得到有机相；

（2）将mRNA溶于缓冲液中，构成水相；

（3）将有机相与水相混匀得到混合液，用缓冲液将混合液稀释50~100倍后浓缩，将混合液中的溶媒替换为缓冲液，得到疫苗；

所述有机溶液包括C1~C4低碳醇；

所述（2）中的缓冲液为柠檬酸盐缓冲液或醋酸钠溶液；

所述有机相的浓度为3~10mg/ml；

有机相与水相的体积比为按1：2~4；

混匀采用微流控设备，流速控制为3mL/min。