[发明专利]使用光学显微镜对染色的网织红细胞进行成熟度分类

说明书

本发明涉及使用光学显微镜对染色的网织红细胞进行成熟度分类。具体地，本发明涉及一种对来自全血样品的网织红细胞进行成熟度分类的方法，包括：利用超活体凝集染色试剂或荧光凝集染料将样品染色；利用光束照射染色的样品以检测网织红细胞；确定每个网织红细胞的参数(i)网状组织面积(Ar)相对于全细胞面积(Ac)的分数(Λ)和(ii)网状组织的周长(Ur)相对于网状组织面积(Ar)的分数(Γ)；和根据确定的Λ和Γ值将网织红细胞成熟度分类为4个主要成熟度类别中的1个。

技术领域

本发明涉及一种对来自全血样品的网织红细胞(reticulocyte，网状细胞)进行成熟度分类(maturity classifying)的方法，包括：利用超活体凝集染色试剂(supravitalagglutinating dyeing reagent，体外活体凝集染色试剂)或荧光凝集染料(fluorescentagglutinating dye)将样品染色；利用光束照射(illuminate)染色的样品以检测网织红细胞；确定每个网织红细胞的参数：(i)网状组织面积(reticulum area)(Ar)相对于全细胞面积(whole cell area)(Ac)的分数(Λ)和(ii)网状组织的周长(perimeter of thereticulum)(Ur)相对于网状组织面积(Ar)的分数(Γ)；和根据确定的Λ和Γ值，将网织红细胞成熟度分类为4个主要成熟度类别中的1个。

背景技术

红细胞生成的监测对于确定患者的健康状况和对不同治疗的响应至关重要，例如在缺铁性贫血或化疗恢复期中。在红细胞生成过程中，当晚期成红细胞失去其细胞核时，发育的细胞随后被称为网织红细胞，其含有丝状RNA网络，即网状组织。从外周血中获得的网织红细胞易于获取，并通过测定细胞计数和成熟来指示红细胞(RBC)的繁殖率(Piva etal.,2015,Clinics in Laboratory Medicine,35,133-163)。通常使用两种主要的检测网织红细胞的方法，网状组织的凝集荧光染色或超活体染色。两种染色方法都将细丝状RNA链团聚成网络状细丝，这通过显微镜可观察。

虽然与光学显微镜中手动计数的细胞相比，自动化血液学分析仪更精确、准确和再现地测定网织红细胞参数，但每种分析仪使用不同的试剂，这对与RNA和其它细胞成分的结合表现出不同的敏感性。因此，遍及不同的染色方法，不存在用于确定网织红细胞成熟度的通用分类(Van Den Bossche et al.,2002,Clin.Chem.Lab.Med.,40(1),69-73)。通过确定荧光方法的未成熟网织红细胞分数(IRF)来采取统一分类的方法。IRF是较不成熟网织红细胞的数目与网织红细胞总数相比的分数(Heimpel et al.,2010,Med.Klin.,105,538-543)。然而，由于没有为每个类别找到共识，因此IRF也在不同的分析仪之间变化(Riley etal.,2001,J.Clin.Labor.Anal.,15,267-294)。一种不同的分类方法基于20世纪30年代Ludwig Heilmeyer的著作，其定义了4个成熟类别，包括具有稠密网状组织的不成熟网织红细胞(类别1)、具有广泛而松散的网状网络的网织红细胞(类别2)、具有散乱网状组织网络的网织红细胞(类别3)和具有散乱网状组织颗粒的成熟网织红细胞(类别4)(Riley etal.,2001,J.Clin.Labor.Anal.,15,267-294)。

由于不同自动化血液学分析仪之间的差异，在光学显微镜中手动计数仍然是诊断确定网织红细胞成熟类别的黄金标准。对于确定全血细胞计数的所有参数的装置也越来越感兴趣，所述装置光学上类似于光学显微镜。

因此，需要一种标准度量来分析染色的网织红细胞，其可以连接到手动，特别是自动显微镜分析以及衍生的诊断检测。

发明内容