[发明专利]使用光学显微镜对染色的网织红细胞进行成熟度分类

权利要求书

1.一种对来自全血样品的网织红细胞进行成熟度分类的方法，包括：

(a)利用超活体凝集染色试剂或荧光凝集染料将所述样品染色；

(b)在光检测装置、优选显微镜中，利用优选具有200nm至780nm波长范围的光束照射染色的样品，以检测网织红细胞；

(c)确定每个网织红细胞的参数(i)网状组织面积(Ar)相对于全细胞面积(Ac)的分数(Λ)和(ii)网状组织的周长(Ur)相对于所述网状组织面积(Ar)的分数(Γ)；以及

(d)根据确定的Λ和Γ值，将网织红细胞的成熟度分类为4个主要成熟度类别中的1个。

2.根据权利要求1所述的方法，另外包括以下步骤作为最后一步：枚举所述网织红细胞，其中，所述枚举优选地按类别和按样品进行。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，利用选自NMB(新亚甲基蓝)、亮甲酚蓝、结晶紫、甲基紫和尼罗蓝的超活体凝集染色试剂进行所述染色；其中，所述染色任选地进一步包括化学核酸交联的步骤，所述交联优选地利用氮芥、顺式二氯二氨合铂(II)或衍生物、或氯乙基亚硝基脲(CENU)来进行。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，利用选自吖啶橙、金胺O、D-甲基氧杂羰花青、溴化乙锭、派洛宁Y、硫磺素-T和噻唑橙的凝集荧光染料进行所述染色，其中，所述染色任选地进一步包括化学核酸交联的步骤，所述交联优选地利用氮芥、顺式二氯二氨合铂(II)或衍生物、或氯乙基亚硝基脲(CENU)来进行。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，利用包括成像模块的装置进行步骤(c)，所述成像模块优选地是被设计以执行形态分割操作的成像模块。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述方法另外地包括以下步骤作为步骤(e)：将每个染色的网织红细胞与被专家独立地分类的网织红细胞的图像存储库进行形态比较，优选地导致对形态分类与步骤(d)的分类不同的网织红细胞进行标记。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述形态比较包括将所述染色的网织红细胞的图像应用至基于机器学习的方法，所述基于机器学习的方法利用所述网织红细胞的图像存储库的图像进行训练。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，所述成熟度分类包括：根据比率Λ/Γ将网织红细胞分配至类别1、2、3或4。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，约2.5的Λ/Γ值指示为类别1，约1至约2.5的Λ/Γ值指示为类别2，约0.35至约1的Λ/Γ值指示为类别3，并且约0.35的Λ/Γ值指示为类别4。

10.一种用于根据从全血样品拍摄的一个或多个图像对网织红细胞进行成熟度分类的计算机实现的方法，包括在图像内确定每个网织红细胞的参数(i)网状组织面积(Ar)相对于全细胞面积(Ac)的分数(Λ)和(ii)网状组织的周长(Ur)相对于所述网状组织面积(Ar)的分数(Γ)；以及根据Λ和Γ值将所述网织红细胞的成熟度分类为4个主要类别，优选另外地包括枚举所述网织红细胞的步骤。

11.一种用于监测和确定受试者的健康状况和/或受试者对治疗的反应的体外方法，包括利用从所述受试者获得的一个或多个全血样品执行权利要求1至10中任一项所述的方法。

12.根据权利要求11所述的体外方法，其中，当初始样品与在2天、3天、4天、5天、6天、7天或更多天数后从所述受试者采集的第二或另外的样品进行比较时，类别2、3或4的网织红细胞数目的增加，优选类别3或4的网织红细胞数目的增加，更优选类别4的网织红细胞数目的增加在低网织红细胞疾病中指示所述受试者的健康状况的改善和/或对所述治疗的积极响应，或者在高网织红细胞疾病中指示所述受试者的健康状况的恶化和/或对所述治疗的消极响应。