[发明专利]一种LC-MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法

说明书

本发明公开了一种LC‑MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法，其技术方案是：检测物质为同型半胱氨酸，LC‑MS/MS技术是液相色谱串联质谱检测技术，包括以下步骤：S1：干血斑处理：待检测人员在收集卡上DBS卡的每个圈中滴一滴10微升的全血，确保覆盖整个圈切完全渗透该滤纸，在室温下干燥一段时间，在血斑完全干燥后，使用塑封带将干燥收集卡进行封装，一种LC‑MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法有益效果是：提升了对同型半胱氨酸含量测定的准确性，使得LC‑MS/MS技术测定效率大大提升，避免了现有LC‑MS/MS技术测定的处理过程相对复杂，步骤较多，且仪器分析时间长，导致测定处理时间较长，对同型半胱氨酸测定也变得不准确的问题。

技术领域

本发明涉及同型半胱氨酸检测技术领域，具体涉及一种LC-MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法。

背景技术

同型半胱氨酸是一种含硫氨基酸，为蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中产生的重要中间产物。同型半胱氨酸在体内能被分解代谢，浓度维持在较低水平。但在日常生活中由于原发性原因和继发性原因会影响血同型半胱氨酸代谢导致同型半胱氨酸浓度堆积升高，会大幅增加冠心病、外周血管疾病及脑血管疾病的发病风险。

目前通过将患者槽全血样品收集在卡纸上然后干燥后，得到干血斑块，接着通过LC-MS/MS技术测定干血斑中的同型半胱氨酸，而LC-MS-MS是液相色谱- 串联质谱，是将经过第一次质谱检测的离子以某种方式碎裂后再进行质谱检测。但是现有大多数LC-MS/MS技术测定的处理过程相对复杂，步骤较多，且仪器分析时间长，导致测定处理时间较长，使得测定效率不高，对同型半胱氨酸测定也变得不准确。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明提供一种LC-MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法，通过液相色谱串联质谱检测技术对干血斑中的同型半胱氨酸的含量进行检测，以解决现有LC-MS/MS技术测定的处理过程相对复杂，步骤较多，且仪器分析时间长，导致测定处理时间较长，对同型半胱氨酸测定也变得不准确的问题。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种LC-MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法，检测物质为同型半胱氨酸，LC-MS/MS技术是液相色谱串联质谱检测技术，包括以下步骤：

S1：干血斑处理：待检测人员在收集卡上DBS卡的每个圈中滴一滴10微升的全血，确保覆盖整个圈切完全渗透该滤纸，在室温下干燥一段时间，在血斑完全干燥后，使用塑封带将干燥收集卡进行封装；

S2：干血斑萃取：用打孔器在样品区截取一个小圆片，圆片的直径为6毫米，加入含有内标物的萃取剂中，振荡混匀后离心，去上层液体，得到待测样品；

S3：检测条件：液相色谱条件包括色谱柱、流动相、流速、柱温和进样量，串联质谱条件包括离子源、检测方式、离子源电压和各气流气要求，去簇电压、碰撞能量应优化至最佳灵敏度；

S4：开始检测：将步骤S2所得的经过处理的待测样品，按步骤S3设定的参数通过液相色谱-三重四级杆质谱联用仪进行同型半胱氨酸的检测。

具体的，干血斑块经溶剂萃取后，通过液相色谱串联质谱检测方法分析干血斑中待检测组分的信息来反映患者的诊断结果。

优选的，所述在S1中的收集卡中填写待检测人员的姓名和采集日期等信息，且常采用具有蛋白保存功能的滤纸片进行样本采集。

具体的，填写待检测人员的姓名和采集日期等信息，以便于检测结果出来之后，可以迅速找到待检测人员的信息，分析待检测人员的身体情况。

优选的，所述S1中待检测人员可以使用静脉血滴在滤纸上，至少有3个血斑，且每个血斑直径大于8毫米，血滴自然渗透，滤纸正反面血斑一致，且血斑无污染，血斑无渗血环，可以使用ACD抗凝剂防止血液凝结，但是不可以使用含碘的消毒剂。