[发明专利]一种LC-MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法

权利要求书

1.一种LC-MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法，其特征在于：检测物质为同型半胱氨酸，LC-MS/MS技术是液相色谱串联质谱检测技术，包括以下步骤：

S1：干血斑处理：待检测人员在收集卡上DBS卡的每个圈中滴一滴10微升的全血，确保覆盖整个圈切完全渗透该滤纸，在室温下干燥一段时间，在血斑完全干燥后，使用塑封带将干燥收集卡进行封装；

S2：干血斑萃取：用打孔器在样品区截取一个小圆片，圆片的直径为6毫米，加入含有内标物的萃取剂中，振荡混匀后离心，去上层液体，得到待测样品；

S3：检测条件：液相色谱条件包括色谱柱、流动相、流速、柱温和进样量，串联质谱条件包括离子源、检测方式、离子源电压和各气流气要求，去簇电压、碰撞能量应优化至最佳灵敏度；

S4：开始检测：将步骤S2所得的经过处理的待测样品，按步骤S3设定的参数通过液相色谱-三重四级杆质谱联用仪进行同型半胱氨酸含量的检测。

2.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法，其特征在于：所述在S1中的收集卡中填写待检测人员的姓名和采集日期等信息，且常采用具有蛋白保存功能的滤纸片进行样本采集。

3.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法，其特征在于：所述S1中待检测人员可以使用静脉血滴在滤纸上，至少有3个血斑，且每个血斑直径大于8毫米，血滴自然渗透，滤纸正反面血斑一致，且血斑无污染，血斑无渗血环，可以使用ACD抗凝剂防止血液凝结，但是不可以使用含碘的消毒剂。

4.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法，其特征在于：所述S1中待检测人员将血滴仅滴在滤纸的一面，不要在同一滤纸圆圈中重复滴上血液。

5.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法，其特征在于：所述S1中干燥血斑时保持滤纸悬空，水平固定在桌面边缘，以保证充分干燥，注意使卡片远离直接的热源或日光。为了避免交叉污染，一旦采集血样后，勿将卡片重叠放置，在封装时不要用手接触血斑，以防样本被污染。

6.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法，其特征在于：所述S2中在打孔器打孔过程中，要严格按照卡纸圆圈进行打孔，防止在打孔过程中样本间相互污染而影响检测结果。

7.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法，其特征在于：所述S2中通过振荡混合后的萃取液，离心后得到上层液体，将待测样品萃取出来。

8.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法，其特征在于：所述S3中液相色谱的色谱柱240mm×2.1mm；流动相包括含0.05％(v/v)一0.18％(v/v)冰醋酸和0.01％(v/v)一0.06％(v/v)氨水的甲醇溶液；流速为250uL/min；柱温设置为室温；进样量设置为22uL。

9.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法，其特征在于：所述S3中串联质谱的离子源为电喷雾电离-正离子模式；检测方式设置为多反应监测；离子源电压设置为5500V；各气流：碰撞气、气帘气、雾化气、辅助气均设置为高纯氮气，且在使用前调节各气流流量以使质谱灵敏度达到检测要求。

10.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS技术测定干血斑中同型半胱氨酸的方法，其特征在于：所述LC-MS/MS通过液相色谱将待测样品的不同组分进行分离，然后将每个组分送入质谱仪进行分析，通过第一个四极杆电离组分分子，选定的分子离子经第二个四极杆进行碰撞破碎，产生的子离子由第三个四极杆进行分析，用检测器测量样品，以得到待测样品中同型半胱氨酸的含量。