[发明专利]一种乳腺癌靶向结构的猫爪草多臂磷酸内酯类物质的制备方法及应用

说明书

本发明涉及一种乳腺癌靶向结构的猫爪草多臂磷酸内酯类物质的制备方法及应用，将清洗后的猫爪草烘干、磨碎、过筛后加入水中，利用纤维素水解酶搅拌下酶解3小时，再加入果胶酶和木瓜蛋白酶，酶解2小时，之后加入淀粉酶酶解1小时后过滤，滤液中加入叶酸、壳聚糖海藻酸钠和苯硼酸溶液，于80‑100℃的水浴锅中搅拌反应10‑15小时，所得混合液减压蒸馏10小时，得到的液体冷冻干燥，即得到所述的多臂磷酸内酯类物质。本发明以猫爪草为原料，利用生物酶解法获得生物活性物质猫爪草小毛茛内酯，并与叶酸、壳聚糖海藻酸钠、和苯硼酸反应制备猫爪草多臂磷酸内酯类物质，为猫爪草中多臂磷酸内酯类物质开发提供了一定的理论依据，为以后产业开发及产业升级奠定了基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种乳腺癌靶向结构的猫爪草多臂磷酸内酯类物质的制备方法及应用。

背景技术

猫爪草(Ranunculus ternatus Thunb)属毛茛科小毛茛的块根部分，别名三散草、小毛茛，属毛茛科草本植物，是20世纪50年代在河南省信阳市发现的一种无名野草。猫爪草在固始县呈野生分布，性温，味甘、辛，入肝、肺经，具有清热解毒、消肿散结、止咳祛痰等功效，临床多用于治疗肺结核、淋巴结结核、咽喉炎、疟疾等症状，近年来，研究人员发现，猫爪草对恶性肿瘤的治疗具有显著功效。具有抗肿瘤、抗菌作用、化痰散结、调免疫、抗氧化等作用，被列为国家重点发展的63种紧缺中药材之一。

据报道，猫爪草的主要化学成分包括甾醇、内酯、不饱和脂肪酸、多糖、微量元素等，而活性部位筛选试验，目前对猫爪草多糖的研究报道较多。其重要研究是关于猫爪草多糖的生物活性测定和结构分析等一系列方法。多糖具有抗炎的生物学活性，能显著增强网状内皮系统的活性。癌细胞是一种特异化的炎症病变，具有炎性介质，是参与炎症反应的化学活性物质趋特异性，包括趋化因子衰老和细胞因子凋亡，具有不可控的特征，且可与炎性细胞相互作用而产生癌变，因此用多糖只能增强正常细胞的免疫能力，而不具备控制癌细胞特异性的能力。

近来研究发现，猫爪草成药及猫爪草单复方煎剂等对肺癌、恶性淋巴瘤、乳腺肿瘤、甲状腺瘤及妇科子宫肌瘤具有较好的治疗效果，其中主要功效在于猫爪草中黄酮、多糖、皂苷、小毛茛内酯等成分。多臂磷酸内酯类物质是一种新型的猫爪草小毛茛内酯，具有很强的捕捉癌细胞和抑制癌细胞生长的能力，对未来癌症疾病具有一定的研究价值和治疗效果。当前，猫爪草的开发基本上都停留在中药制剂的研制，单一的单体提取和分离目前研究较少，而且仅仅停留在实验室阶段，很难实现产业化。另外猫爪草的成分非常复杂，分离的成本和费用比较高，所以一般都只停留在基础的研究和重要的开发。

发明内容

本发明的目的在于提出一种乳腺癌靶向结构的猫爪草多臂磷酸内酯类物质的制备方法及应用，以猫爪草为原料，利用生物酶解法获得生物活性物质，并与叶酸、壳聚糖海藻酸钠和苯硼酸反应制备猫爪草多臂磷酸内酯类物质，为猫爪草中多臂磷酸内酯类物质开发提供了一定的理论依据，为以后产业开发及产业升级奠定了基础。

本发明具体是通过以下技术方案来实现的，依据本发明提出的一种乳腺癌靶向结构的猫爪草多臂磷酸内酯类物质的制备方法，具体包括：

(1)将消毒洁净后的猫爪草烘干、磨碎、过60目筛，取一定量过筛后的猫爪草粉末加入水中搅拌均匀，再加入纤维素水解酶，调节pH值在9.0左右，在常温搅拌下酶解3小时，得酶解液；

(2)将果胶酶和木瓜蛋白酶分别加入到步骤(1)所得酶解液中，调节混合体系的pH值在9.0左右，常温搅拌下酶解2小时；

(3)将淀粉酶加入到步骤(2)所得反应体系中，调节体系的pH值在8.0左右，在常温搅拌下，酶解1小时后过滤，除去滤渣得到一定体积的滤液；

(4)将一定量的叶酸固体、壳聚糖海藻酸钠固体和苯硼酸溶液加入到步骤(3)所得滤液中，搅拌30分钟后放入到80-100℃的水浴锅中，调节体系pH值为7.0，在80-100℃的水浴锅中搅拌反应10-15小时；