[发明专利]一种肺癌微肿瘤细胞模型的培养方法

权利要求书

1.一种用于培养肺癌微肿瘤模型的培养基，由双抗P/S、HEPES、非必需氨基酸溶液、GlutaMax、人重组蛋白EGF、人重组蛋白bFGF、人重组蛋白MSP、人重组蛋白IL-2、人重组蛋白IL-15、人重组蛋白HGF、Forskolin、B27、ITS-X、Y-27632和Advanced DMEM/F12培养基组成；

其中，所述双抗P/S中的青霉素的终浓度为100-200U/mL；所述双抗P/S中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL；所述HEPES的终浓度为8-12mM；所述非必需氨基酸溶液的终浓度为0.8-1.2％(体积百分含量)；所述GlutaMax的终浓度为0.8-1.2％(体积百分含量)；所述人重组蛋白EGF的终浓度为10-100ng/mL；所述人重组蛋白bFGF的终浓度为10-50ng/mL；所述人重组蛋白MSP的终浓度为5-25ng/mL；所述人重组蛋白IL-2的终浓度为10-100ng/mL；所述人重组蛋白IL-15的终浓度为10-100ng/mL；所述人重组蛋白HGF的终浓度为10-100ng/mL；所述Forskolin的终浓度为2-10μM；所述B27的终浓度为1.5-2.5％(体积百分含量)；所述ITS-X的终浓度为0.8-1.2％(体积百分含量)；所述Y-27632的终浓度为5-20μM；余量均为Advanced DMEM/F12培养基。

2.一种用于培养肺癌微肿瘤模型的成套试剂，由权利要求1所述培养基和如下中的全部或部分组成：样本解离液、样本保存液、样本清洗液、细胞消化液、消化终止液和细胞冻存液；

所述样本解离液由胶原酶I、胶原酶IV和PBS组成；其中，所述胶原酶I在所述样本解离液中的终浓度为150-250U/mL；所述胶原酶IV在所述样本解离液中的终浓度为150-250U/mL；余量均为PBS；

所述样本保存液由胎牛血清、双抗P/S、HEPES和HBSS组成；其中，所述胎牛血清在所述样本保存液中的终浓度为1-5％(体积百分含量)；所述双抗P/S中的青霉素在所述样本保存液中的终浓度为100-200U/mL；所述双抗P/S中的链霉素在所述样本保存液中的终浓度为100-200μg/mL；所述HEPES在所述样本保存液中的终浓度为8-12mM；余量均为HBSS；

所述样本清洗液由双抗P/S和PBS组成；其中，所述双抗P/S中的青霉素在所述样本清洗液中的终浓度为100-200U/mL；所述双抗P/S中的链霉素在所述样本清洗液中的终浓度为100-200μg/mL；余量均为PBS；

所述细胞消化液组成如下：每10mL所述细胞消化液中含有4-6mL Accutase，终浓度为5mM的EDTA，1.5-2.5mL TrypLE Express，余量为PBS；

所述消化终止液由胎牛血清、双抗P/S和DMEM培养基组成；其中，所述胎牛血清在所述消化终止液中的终浓度为8-12％(体积百分含量)；所述双抗P/S中的青霉素在所述消化终止液中的终浓度为100-200U/mL；所述双抗P/S中的链霉素在所述消化终止液中的终浓度为100-200μg/mL；余量均为DMEM培养基；

所述细胞冻存液由Advanced DMEM/F12培养基、DMSO和1％甲基纤维素溶液组成；其中，所述Advanced DMEM/F12培养基、所述DMSO和所述1％甲基纤维素溶液的体积配比为20:2:(0.8-1.2)；所述1％甲基纤维素溶液是浓度为1g/100ml的甲基纤维素水溶液。

3.权利要求1所述的培养基或权利要求2所述成套试剂在培养肺癌微肿瘤模型中的应用。

4.一种培养肺癌微肿瘤模型的方法，包括如下步骤：

(a1)用权利要求2中所述的样本解离液对肺癌实体瘤组织进行解离处理；

(a2)利用权利要求1所述培养基悬浮培养步骤(a1)解离出来的细胞，形成细胞团，即得肺癌微肿瘤模型。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(a1)中，是按照包括如下步骤的方法用所述样本解离液对所述肺癌实体瘤组织进行解离的：按1mL所述样本解离液不超过0.5mg组织的用量，将剪碎后的所述肺癌实体瘤组织用所述样本解离液在37℃条件下进行样本解离，解离时间15分钟至2小时。