[发明专利]一种与木本植物铵态氮应答相关的miRNA及其应用

说明书

本发明公开了一种与木本植物铵态氮应答相关的miRNA及其应用，包括miRNA，所述miRNA为铵态氮处理条件下，在木本植物根系中上调表达的miRNA(pc‑miR166b)，所述miRNA的靶基因为真核翻译起始因子基因(eukaryotic translation initiation factor，eIF)，所述miRNA在铵态氮处理过程中高表达，通过下调靶基因的表达，参与木本植物根系对铵态氮的应答过程，miRNA(pc‑miR166b)与参与木本植物根系对铵态氮的应答过程中有很好的相关性，通过有效性和分子生物学验证，pc‑miR166b的表达量在铵态氮处理和对照组处理样本间的差异极显著，本发明为培育高效吸收利用土壤氮素的木本植物新种质意义重大，适合于推广应用。

技术领域

本发明涉及一种基因工程育种技术，尤其涉及一种与木本植物铵态氮应答相关的miRNA及其应用。

背景技术

氮素是植物生长发育必不可少的大量元素之一，也是植物根系从土壤中吸收最多的矿质元素，对其生长发育具有重要意义。但是，土壤中的氮元素含量并不均一，且在土壤空间中的分布复杂多变，如何利用土壤中复杂多变的氮素环境发展农林业，是生物科学技术迫切需要解决的重大课题。其中，利用传统育种方式培育高氮素吸收利用效率木本植物新品种虽然可行，但是难以实现遗传定向改良且进展缓慢。随着现代生物学技术的发展，人们寄希望于利用基因工程育种技术培育高氮素吸收利用效率木本植物新品种，进而既可以实现农林生态系统氮素高效利用的经济效益，也能实现减少土壤氮肥施加，保护生态环境的环保效益，具有重要理论与实践意义。

当今，对于植物高氮素吸收利用效率机理的研究已经有很多，但从总体上讲，国内外学者对植物高氮素吸收利用效率机理的研究多局限于生理层面，植物高氮素吸收利用效率的分子机制仍不清楚，严重限制了木本植物高氮素利用效率新品种培育。miRNAs及其靶基因作用机制的解析，是树木抗逆生理与分子生物学研究领域的前沿热点。针对木本植物特定组织中miRNAs对氮素响应作用机制的研究发现，为利用现代分子生物学手段，培育高氮素吸收效率木本植物新品种揭开了一个新视角。

同时，miRNA参与植物非生物胁迫应答响应是通过结合靶基因mRNA进行负调控实现的。如果仅通过生物信息学分析预测，将得到大量靶基因，验证难度巨大。而通过同一组织小RNA，降解组和转录组测序，并进行联合分析，会更加精准的获得参与植物非生物胁迫应答响应的miRNA及其靶基因，为鉴定木本植物特定组织对氮素响应这类复杂生理机制提供一个全新手段。

有鉴于此，本发明提出一种与木本植物铵态氮应答相关的miRNA及其应用，以解决现有技术中的不足之处。

发明内容

本发明的目的是提供了一种与木本植物铵态氮应答相关的miRNA及其应用，以解决现有技术中存在的上述技术问题。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明的与木本植物铵态氮应答相关的miRNA，所述miRNA为铵态氮处理过程中上调的miRNA，其核苷酸序列为：

成熟体序列：TCGGACCAGGCTTCATTCTT；

前体序列：

ggttgagaggaatgttgtctggctcgaggtcattgaggccatgattatacagacatgacattacctgatgacagctgagaaaattcaaagtctgtgtgtatcttgcacctcgatgattcTCGGACCAGGCTTCATTCCTtccaacaaa；

所述miRNA的靶基因是真核翻译起始因子基因，所述miRNA通过下调真核翻译起始因子基因的表达，参与木本植物根系对铵态氮的应答过程；

所述真核翻译起始因子基因全长序列：