[发明专利]一种H7N9亚型禽流感病毒样颗粒疫苗制剂及制备和应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种H7N9亚型禽流感病毒样颗粒疫苗制剂及制备和应用。本发明提供的H7N9亚型禽流感病毒样颗粒疫苗制剂包含重组嵌合蛋白HMN和H7N9亚型禽流感病毒样颗粒，其中，所述的重组嵌合蛋白HMN由禽流感病毒保守性抗原表位、蜂毒信号肽以及6x‑His标签蛋白嵌合而成，该重组嵌合蛋白HMN与H7N9亚型禽流感病毒样颗粒抗原联合使用，弥补了禽流感病毒样颗粒疫苗针对变异毒株交叉保护效力不足的缺陷，针对H7N9亚型变异毒株的攻击提供完全的保护，从而实现对禽流感疫情更有效的防控。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种H7N9亚型禽流感病毒样颗粒疫苗制剂及制备和应用。

背景技术

禽流感病毒(Avian Influenza virus，AIV)是囊膜型的、分节段的、负链RNA病毒，属于正黏病毒科，流感病毒属。由H7N9亚型禽流感病毒引起的高致病性禽流感(Highlypathogenic avian influenza，HPAI)对家禽养殖业危害巨大。更为严重的是，H7N9亚型禽流感病毒已突破禽类和哺乳动物的种间障碍，可造成人类的感染。由于H7N9亚型禽流感病毒对家禽养殖业和人类健康造成双重威胁，因此防控H7N9亚型禽流感不仅能够挽回巨大的经济损失，而且具有重要的公共卫生意义。当前防控H7N9亚型禽流感主要依赖疫苗接种，通过接种禽流感疫苗，我国在防控H7N9亚型禽流感方面取得了不错的成果。但是在免疫压力下，H7N9禽流感病毒不断进化，频繁的变异导致疫苗效力不断下降，造成免疫失败的现象，因此，需要不断更新疫苗毒株来应对AIV的变异。禽流感病毒持续的进化，给H7N9禽流感病毒的防控带来了巨大的压力。

研究证明禽流感病毒保守的抗原表位能够诱导交叉保护性免疫。禽流感病毒保守的抗原表位主要集中在血凝素蛋白茎区HA2、基质蛋白M2的胞外域M2e以及核蛋白NP。禽流感病毒保守性抗原表位多重复串联以及多个抗原表位的结合使用可提高其免疫原性及交叉保护能力。Kwak等(Kwak C,Nguyen QT,Kim J,Kim T-H,Poo H.Influenza ChimericProtein(3M2e-3HA2-NP)Adjuvanted with PGA/Alum Confers Cross-Protectionagainst Heterologous Influenza A Viruses.J Microbiol Biotechnol(2021)31(2):304-16.Epub 2021/02/28.doi:10.4014/jmb.2011.11029.)基于M2e、HA2和NP生成了一种嵌合蛋白(3M2e-2HA2-NP)，免疫小鼠后可诱导交叉保护抵抗异源禽流感病毒的攻击。Kim等(Kim Y-J,Lee Y-T,Kim M-C,Lee Y-N,Kim K-H,Ko E-J,et al.Cross-ProtectiveEfficacy of Influenza Virus M2e Containing Virus-Like Particles Is Superiorto Hemagglutinin Vaccines and Variable Depending on the Genetic Backgroundsof Mice.(2017)8(1730).doi:10.3389/fimmu.2017.01730.)基于M2e生成了一种流感病毒样颗粒(M2e5x VLP)，免疫小鼠后可诱导交叉保护性免疫应答。此外，T细胞免疫应答被证明与禽流感交叉保护性免疫有关，Townsend等(Townsend ARM,Rothbard J,Gotch FM,Bahadur G,Wraith D,McMichael AJ.Pillars Article:The Epitopes of InfluenzaNucleoprotein Recognized by Cytotoxic T Lymphocytes Can Be Defined with ShortSynthetic Peptides.1986.lt；emgt；Celllt；/emgt；44:959–968.The Journal ofImmunology(2006)176(9):5141.)证明NP蛋白第55-69个氨基酸为CD4辅助性T细胞表位，在所有禽流感病毒中高度保守。