[发明专利]一种基于LC-MS/MS技术检测药物胺碘酮的方法

说明书

本发明公开了一种基于LC‑MS/MS技术检测药物胺碘酮的方法，取用100μL血浆样品进行简单的蛋白沉淀处理后测定胺碘酮浓度，该方法前处理简单、质谱采集时间短、成本低廉、方便实验室进行大规模临床样本检测。

技术领域

本发明属于药物浓度检测领域，具体涉及一种采用高效液相色谱串联质谱技术测定人血浆胺碘酮的方法。

背景技术

心律失常是临床治疗中的难点问题。在心律失常治疗中，尤其是在心律失常急性期，药物治疗占据重要的临床地位。目前，用于心律失常治疗的药物非常有限，胺碘酮是其中常用的广谱抗心律失常药，具有扩张血管、减缓心率、改善心肌供血的作用，而且能够抑制交感神经活性，改善患者心功能，在心律失常的临床治疗中应用最为广泛。

胺碘酮1962年由Labaz实验室研制成功，1967年作为抗心绞痛药物在瑞士、比利时等国上市，由于副作用于1967年退市，在1974年发现其抗心律失常作用。盐酸胺碘酮片，是由Sanofi-Aventis France (法国赛诺菲-安万特)研发的第三类抗心律失常药，于1980年8月经英国药品和健康产品管理局 (MHRA)批准在英国上市，商品名Cordarone，规格100mg和200mg；于1985年12月由Wyethpharms (惠氏)公司在美国获得FDA批准上市；1986年12月在中国香港获批上市，商品名：Cordarone，规格：200 mg；1999年经国家药品监督管理局批准进口我国，商品名为可达龙，规格200mg。

由于胺碘酮治疗窗较窄，体内代谢过程存在较大的个体差异，所以对其血液中药物浓度的检测是调整剂量，减少不良反应的重要参考，在临床用药中具有重大意义。目前胺碘酮治疗药物检测的常见方法有：紫外分光光度法、高效液相色谱法。这些方法存在前处理复杂、定性定量不够准确、成本高、分析时间长、或对实验人员技术要求高等问题。液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)越来越广泛应用于药物、食品、环境、法医、临床等各个领域。LC-MS/MS具有灵敏度高，选择性强，准确性好等特点，在临床检测上适用范围远远超过放射性免疫检测和化学检测范围，是其他方法无可比拟的。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种基于液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术检测人血浆中胺碘酮药物的含量的检测方法，该方法前处理简单、质谱采集时间短、成本低廉、方便实验室进行大规模临床样本检测。

本发明所述的一种采用高效液相色谱串联质谱技术能分别定量检测血浆中胺碘酮的方法，包括以下步骤：

(1)血浆样品预处理

在黄光室温条件下，将待测样品100μL移取至96孔板，再加10μL氘代内标工作溶液，加入490μL 的乙腈，将样品涡旋5分钟后，在4000rpm、4℃条件下离心5分钟，用移液枪移取上清液400μL至新的96孔板中，在35℃条件下氮气流吹干；加入200μL的含乙腈：水(1：1)(含0.05％甲酸)溶液复溶，涡旋3分钟，在4000rpm、4℃条件下离心5分钟，得到待测样品；

(2)标准曲线和质控血浆样品的配制

使用甲醇配制标曲和质控工作溶液，取上述工作溶液10μL与490μL空白血浆混合配制成不同浓度的标准曲线样品和质控样品，用胺碘酮和内标的峰面积比和标准样品的浓度来建立标准曲线，得到相应的线性回归方程。

(3)采用液相色谱-质谱联用检测

①液相色谱条件：色谱柱：XSelect C18 2.1*50mm 3.5μm；

流动相：水相：2mM乙酸铵水溶液(PH＝3.2)，有机相：乙腈，洗针液：乙腈：水(1:1)(含0.2％甲酸)；

柱温：室温；自动进样器温度：25℃；