[发明专利]一种低密度脂蛋白吸附剂及其制备方法与应用

说明书

本发明提供了一种低密度脂蛋白吸附剂及其制备方法与应用，属于生物技术领域。本发明提供了一种低密度脂蛋白吸附剂的制备方法，该方法包括：采用戊二醛对壳聚糖微球进行改性，得到改性后的壳聚糖微球，然后使用氨甲基磷酸对改性后的壳聚糖微球进行修饰，得到磷酸基修饰的壳聚糖微球，最后对磷酸基修饰的壳聚糖微球进行还原处理，得到所述低密度脂蛋白吸附剂。本发明还提供了按照所述方法制备得到的低密度脂蛋白吸附剂及其应用。本发明提供的制备方法采用戊二醛对壳聚糖微球载体进行改性处理，能够提高磷酸基对于壳聚糖微球载体的修饰量，从而提高吸附剂的使用效果，同时，修饰后的吸附剂稳定性较好，不易发生脱落，安全性好，具有较大的应用价值。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体而言，本发明涉及一种低密度脂蛋白吸附剂及其制备方法与应用。

背景技术

高脂血症(hypercholesterolemia)是引起动脉硬化以及冠心病和心肌梗塞的重要因素。有研究证明，人体血液中低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)的升高及由此而产生的氧化态低密度脂蛋白是致病的关键因素[Bruckert E.LDL-apheresis:question for future[J]Tranfusion Sci,1999,20:43-47.]，相反高密度脂蛋白(highdensity lipoprotein，HDL)有抑制动脉硬化的作用。对于严重的高脂血症患者，特别是家族性高脂血症患者，常规的疗法(饮食控制、药物治疗)效果不理想，需要借助血液净化疗法。血液净化清除LDL的方法有血浆置换、血液滤过、体外肝素诱导沉淀和血液灌流吸附法，其中吸附法具有选择性高、副作用较少和成本低等优点。血液灌流的核心组成是血液净化吸附剂。

临床上应用的LDL吸附剂从作用原理可分为两类：免疫吸附剂和亲和吸附剂。其中，免疫吸附剂是将ApoB、Lp(a)的抗体偶联到吸附剂载体上，制成免疫吸附剂。免疫吸附剂的优点是吸附能力强，特异性强，因此吸附效果较好；但是，其也存在价格昂贵、抗原从载体上脱落后会随着血液进入人体，从而引起免疫反应等缺陷。亲和吸附剂主要是利用LDL表面的ApoB结构域上的呈正电性的氨基酸与阴离子通过静电吸引作用相结合而制得的一种吸附剂。目前，使用较多的是羧基、磺酸基或磷酸基。磷酸与磺酸相比，属于较弱的酸，与羧酸相似，对血液成分的不良影响较小，而且人体缓冲体系中也含有磷酸成分，因此，近来使用磷酸基作为阴离子制备亲和吸附剂的研究较多。

但是，以磷酸基作为阴离子配基的LDL吸附剂在使用过程中普遍存在吸附效果较差的问题。因此，有必要对磷酸LDL吸附剂做出进一步的优化，以提供一种效果更好、吸附性能更佳的LDL吸附剂。

发明内容

本发明的发明人在研究中发现，在制备低密度脂蛋白吸附剂的过程中，当使用壳聚糖微球、聚乙烯醇等作为载体，使用磷酸基作为配基时往往制成的低密度脂蛋白吸附剂的吸附效果不是特别理想。进一步，发明人分析了其中的原因，采用一些表征方法发现使用磷酸基作为配基时，其在壳聚糖、聚乙烯醇等载体上的吸附量不是特别大。由于亲和型的吸附剂主要基于吸附剂上的阴离子和低密度脂蛋白中的正电荷相互吸引而产生吸附作用，因此，如果载体上的阴离子的吸附量不够的话，势必会影响吸附剂的吸附效果。

同时，发明人进一步思考了磷酸基在载体微球上吸附量少的原因，由于像壳聚糖微球、聚乙烯醇等载体表面含有大量的羟基，羟基带有一定的电负性，会影响磷酸基与载体微球的结合；此外，由于磷酸基的体积较大，当载体微球上引入一定量的磷酸基后，势必会对后引入的磷酸基产生空间排斥的作用。

为了解决上述技术问题，本发明的一个目的在于提供一种新的低密度脂蛋白吸附剂的制备方法，本发明提供的方法中，通过先使用戊二醛对壳聚糖微球载体进行改性处理，然后再将改性后的壳聚糖微球与氨甲基磷酸进行反应，得到带有磷酸配基的低密度脂蛋白吸附剂。通过戊二醛的两个醛基，避免将磷酸基直接连接到壳聚糖载体上，能够有效地避免产生上述的问题，增加配基磷酸基在壳聚糖表面的修饰量，从而提高吸附剂的吸附效果。

具体而言，本发明提供了如下的技术方案：