[发明专利]一种白芍总苷指纹图谱检测方法

说明书

本发明涉及一种白芍总苷指纹图谱检测方法，所述方法包括以下步骤：1)供试品溶液的配制：取白芍总苷，加入甲醇，混合均匀，滤过，取续滤液；2)检测：吸取供试品溶液，注入液相色谱仪，得到色谱图；3)对比分析：将步骤2所得色谱图和白芍总苷标准指纹图谱通过指纹相似性软件对比，符合率80％以上为合格；其中，所述液相色谱仪的色谱条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以磷酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱。

技术领域

本发明涉及一种中药提取物的指纹图谱检测方法，特别涉及一种白芍总苷的指纹图谱检测方法。

背景技术

白芍，中药名。为毛茛科植物芍药Paeonialactiflora Pall.的干燥根。夏、秋二季采挖，洗净，除去头尾和细根，置沸水中煮后除去外皮或去皮后再煮，晒干。具有养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛，平抑肝阳之功效。常用于血虚萎黄，月经不调，自汗，盗汗，胁痛，腹痛，四肢挛痛，头痛眩晕。

从白芍干燥根中得到芍药苷(paeoniflorin)、芍药内酯苷(albiflorin)、苯甲酰芍药苷(benzoylpaeoniflorin)等具有生理功效成分的混合物，总称白芍总苷(totalglucosides of paeonia，TGP)。

白芍总苷按干燥品计，含芍药苷(C₂₃H₂₈O₁₁)不得少于40.0％，含芍药内酯苷(C₂₃H₂₈O₁₁)不得少于10.0％，含1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖(C₄₁H₃₂O₂₆)不得少于8.0％。

已知，白芍总苷的制备方法如下：取白芍，用75％乙醇溶液提取3次，第一次和第二次为1.5小时，第三次为1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度1.15～1.25(50℃～65℃)的浸膏，加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH值至5.9～6.1，再用乙酸乙酯提取两次，弃去乙酸乙酯层，母液用乙酸乙酯-正丁醇混合溶剂提取3次，合并提取液，提取液浓缩至相对密度1.13～1.20(50℃～65℃)后进行喷雾干燥，粉碎，过筛，混合，即得。

白芍总苷的检测方法如下：

供试品溶液：取本品约50mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解，取出，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液。

对照品溶液：取芍药苷对照品、芍药内酯苷对照品与1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖对照品各适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含芍药苷0.2mg、芍药内酯苷75μg和1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖30μg的混合溶液。

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm×250mm，5μm或效能相当的色谱柱)，以乙腈为流动相A，以三乙胺磷酸溶液[三乙胺-磷酸-水(1:1:1000)]为流动相B按下表进行梯度洗脱；流速为每分钟0.8ml；检测波长为230nm；进样体积5μl。

系统适用性要求

芍药内酯苷峰、芍药苷峰与1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖峰之间的分离度应符合要求。

测定法

精密量取供试品溶液与对照品溶液分别入液相色谱仪，记录色谱图。

限度

供试品溶液色谱图中，除溶剂峰、芍药苷峰、芍药内酯苷峰与1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖峰外，按峰面积归一化法计算单个最大组分峰面积不得大于总峰面积的6％，各组分峰面积的和不得大于总峰面积的26％。