[发明专利]一种白芍总苷指纹图谱检测方法

权利要求书

1.一种白芍总苷指纹图谱检测方法，其特征在于，所述方法，包括以下步骤：

1)供试品溶液的制备：取白芍总苷粉末20-30mg，精密称定，置20-30mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理使溶解，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

2)检测：精密吸取供试品溶液2-10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图；

3)比对分析：将步骤2)所得色谱图和白芍总苷标准指纹图谱进行比对，相似度在90％以上的供试品为合格；

其中，色谱条件如下：

色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05％磷酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速每分钟为1.0mL/min；检测波长为230nm；柱温为20℃，理论板数按芍药苷峰计算应不低于8000；

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述方法，包括以下步骤：

1)供试品溶液的制备：取白芍总苷粉末25mg，精密称定，置25mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理使溶解，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

2)检测：精密吸取供试品溶液5μL，注入液相色谱仪，记录色谱图；

3)比对分析：将步骤2)所得色谱图和白芍总苷标准指纹图谱进行比对，相似度在90％以上的供试品为合格。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述超声处理在300W，40kHz下进行。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱其柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm。

5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述相似度在95％以上为合格。

6.一种白芍总苷标准指纹图谱的制备方法，其特征在于，所述方法，步骤如下：

1)参照物溶液的制备取芍药苷对照品、芍药内酯苷对照品、没食子酸对照品、儿茶素对照品、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含芍药苷200μg、芍药内酯苷40μg、没食子酸8μg、儿茶素10μg、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖20μg、的混合溶液，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

2)供试品溶液的制备：取10批量以上的白芍总苷粉末，每一批25mg，精密称定，置25mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理使溶解，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；其中所述白芍总苷粉末制备方法如下：

提取：取白芍饮片1000g，用75±1％乙醇提取3次，乙醇加入倍量分别为白芍饮片重量的4倍、3倍、3倍，时间各为1.5小时、1.5小时、1小时，提取温度控制在80±5℃进行提取，三次提取，过滤进入浓缩工序，药渣抽干；

浓缩：减压浓缩，浓缩温度控制在50～60℃，真空度控制在-0.06～-0.09Mpa，浓缩至50～65℃相对密度为1.15～1.25，并且控制回收乙醇的浓度小于5％，交付萃取工序；

萃取：a碱化：浓缩液中加入饱和NaHC03溶液将pH值调至5.9-6.1；b乙酸乙酯除杂：在上述药液中，加入乙酸乙酯萃取，萃取用量0.6:1，搅拌时间2～3分钟，静置至分层，具体时间视分离情况而定，取出乙酸乙酯层另置，下层母液同上法再萃取一次，合并乙酸乙酯除杂液，回收乙酸乙酯，浓缩液弃去；c萃取：上述药液用正丁醇：乙酸乙酯＝3:7的混合液在反应罐中萃取，第一次萃取用量1.2:1，搅拌2分钟、静置1.5小时以上分层，第二次及第三次萃取用量为0.6:1，搅拌2分钟、静置1.5小时以上分层，分离得到的正丁醇乙酸乙酯萃取液合并；浓缩：减压回收正丁醇乙酸乙酯萃取液，加水后加热浓缩至50℃～65℃相对密度为1.13～1.20，浓缩温度控制在40℃～60℃，真空度控制在-0.05～-0.09Mpa，得到浓缩液的量为生药量的15％；

干燥：将萃取浓缩液进行喷雾干燥，得到药粉；

3)测定法分别精密吸取空白溶液、参照物溶液和供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，分别记录色谱图；

4)对上述10批量以上的每一批次的色谱图，采用计算机模拟矫正，经过计算和输出，得到标准指纹图谱，该图谱作为标准对照指纹图谱，与生产过程中得到的任何一个批次的产品的指纹图谱比较；

其中，色谱条件如下：

色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05％磷酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速每分钟为1.0mL/min；检测波长为230nm；柱温为20℃，理论板数按芍药苷峰计算应不低于8000；

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述10批量以上是31批次。