[发明专利]联合表达CCR2b的工程化免疫细胞及其制备和应用

说明书

本发明涉及联合表达CCR2b的工程化免疫细胞。具体地，本发明的工程化免疫细胞为T细胞或NK细胞。本发明将含有NKG2D胞外域的CAR分子和CCR2b联合表达于CAR‑T细胞中，因此既能通过CCR2b提高CAR‑T细胞对CCL2、CCL7等趋化因子的灵敏度，向结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌等病灶高效迁移，提高治疗效率；同时又能通过NKG2D CAR分子识别结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌等细胞表面的多种靶点抗原，降低因肿瘤异质性或靶点抗原丢失而导致疗效下降的风险，并提高肿瘤治疗的效果。

技术领域

本发明属于肿瘤免疫和细胞治疗领域，具体地，涉及一种联合表达CCR2b的工程化免疫细胞。

背景技术

细胞免疫治疗是一种新兴的、具有显著疗效的肿瘤治疗模式，是一种自身免疫抗癌的新型治疗方法。它是运用生物技术和生物制剂对从病人体内采集的免疫细胞进行体外培养、修饰改造和扩增后回输到病人体内的方法，以激发、增强机体自身免疫功能，从而达到治疗肿瘤的目的。

T细胞是参与细胞免疫的一类重要的淋巴细胞，通过抗原呈递细胞的信号传递，可以特异性地识别并杀伤肿瘤细胞。然而，肿瘤细胞也会通过减少或丢失抗原表位、免疫抑制作用、肿瘤异质性(即同一种恶性肿瘤在不同患者个体间或者同一患者体内不同部位肿瘤细胞间从基因型到表型上存在的差异)等方式阻碍T细胞的特异性识别，从而逃避机体的免疫应答。

嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell, CAR-T)疗法正是针对该问题应运而生的。具体来说，CAR分子是一种人为设计和构建的受体分子，由信号肽、胞外抗原结合域、铰链区、跨膜区、共刺激结构域、胞内信号传导结构域等部分组成。因此，CAR分子具有特异性识别肿瘤表面抗原、激活T细胞杀伤活性和刺激T细胞增殖等功能。通过采集培养肿瘤患者的T细胞并以人工方法转导CAR分子的编码基因，使患者自体的T细胞表达CAR分子。回输至患者体内后，T细胞可以通过CAR分子高效且特异性地识别并杀伤肿瘤细胞，达到癌症治疗的效果。

CAR-T疗法的概念从1989年首次被首次提出以来，经历了三十年的发展及多轮的技术更迭(图1)。第一代CAR-T仅有作为胞外抗原结合域的单链抗体和作为胞内信号传导结构域的CD3ζ，无法完全激活T细胞的活性，治疗效果不佳。第二代CAR-T在第一代CAR-T的基础上引入了一个共刺激结构域，提高了T细胞的体外增殖能力和细胞因子释放水平。第三代CAR-T在第二代CAR-T的基础上，增加了一个共刺激结构域，虽然可以提高T细胞的杀伤活性，但有可能诱发细胞因子的过量释放。因此，新一代CAR-T在第二代CAR-T的基础上联合表达其他辅助因子，例如联合表达IL-12或IL-2Rβ胞内的STAT3/5结合结构域等，有助于提高肿瘤杀伤活性和安全性等效果。

虽然在血液瘤中CAR-T治疗获得令人满意的效果，但CAR-T对于实体瘤的治疗效果仍有很大的提升空间。原因在于：(1)很多实体肿瘤都难以在早期被发现，具有恶性程度高、复发率高、预后差等特点。例如，83%的结直肠癌患者在首次确诊时已处于中晚期，且44%的患者已经出现了肝、肺等部位的转移，近半数患者生存期不到5年；约70%的卵巢癌患者在确诊时，癌细胞已经发生转移，难以通过手术、化疗、放疗手段治愈，治疗后的复发率仍高达70%以上；90%的胰腺癌患者被确诊时已属晚期，5年生存率仅7%。(2)在实体瘤治疗过程中，肿瘤组织往往具有免疫抑制性的微环境，可以阻碍CAR-T细胞的迁移和浸润。(3)很多恶性实体肿瘤还具有异质性高的特点，单一靶点抗原往往不能达到最佳的治疗效果，且有复发的风险。因此，用于结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌等恶性实体肿瘤患者的CAR-T细胞疗法，需要更进一步提高其作用效率和有效性。

综上所述，本领域仍然需要进一步的研究，针对恶性肿瘤(尤其是实体瘤) 开发一种能更高效、治疗效果更好的工程化免疫细胞。

发明内容

本发明的目的是针对恶性肿瘤(尤其是实体瘤) 提供一种能更高效、治疗效果更好的工程化免疫细胞(如CAR-T细胞)。