[发明专利]联合表达CCR2b的工程化免疫细胞及其制备和应用

权利要求书

1.一种工程化免疫细胞，其特征在于，所述工程化免疫细胞为T细胞，并且所述的免疫细胞具有以下特征：

(a)所述免疫细胞表达嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR靶向肿瘤细胞的表面标志物，其中所述CAR的抗原结合结构域包括NKG2D的胞外结构域；和

(b)所述的免疫细胞表达外源的CCR2b蛋白；

其中，所述CAR的结构如式I所示：

L-NKG2D-H-TM-C-CD3ζ (I)

式中，

L为无或信号肽序列；

NKG2D为NKG2D胞外结构域,其中，所述NKG2D的胞外结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第73-216位所示；

H为无或铰链区；

TM为跨膜结构域；

C为共刺激信号结构域；

CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列；

所述“-”为连接肽或肽键。

2.如权利要求1所述的工程化免疫细胞，其特征在于，

L为选自下组的蛋白的信号肽序列：CD8、GM-CSF、CD4、CD28或CD137；

H为选自下组的蛋白的铰链区：CD8、CD28或CD137；

TM为选自下组的蛋白的跨膜结构域：CD28或CD8；

C为4-1BB来源的共刺激信号结构域。

3.如权利要求1所述的工程化免疫细胞，其特征在于，在式I所示的CAR中，

L为SEQ ID No:3所示的信号肽序列；

H为SEQ ID No:6所示的铰链区；

TM为SEQ ID No:7所示的跨膜结构域；

C为SEQ ID No:8所示的共刺激信号结构域；

CD3ζ为SEQ ID No:9所示的CD3ζ的胞浆信号传导序列。

4.如权利要求1所述的工程化免疫细胞，其特征在于，所述CCR2b蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

5.一种制备权利要求1所述的工程化免疫细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(A)提供一待改造的免疫细胞；和

(B)对所述的免疫细胞进行改造，从而使得所述的免疫细胞表达权利要求1中所述的CAR和外源的CCR2b蛋白，从而获得权利要求1所述的工程化免疫细胞。

6.一种制剂，其特征在于，所述制剂含有权利要求1所述的工程化免疫细胞，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

7.如权利要求6所述制剂，其特征在于，所述制剂中所述工程化免疫细胞的浓度为1×10³-1×10⁸个细胞/ml。

8.一种如权利要求1所述的工程化免疫细胞在制备用于治疗癌症的药物或制剂中的用途，其中，所述癌症为NKG2D配体高表达的癌症。

9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述癌症选自下组：结肠癌、直肠癌、卵巢癌、胰腺癌。

10.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述癌症为NKG2D配体高表达和趋化因子高表达的癌症。

11.一种用于制备权利要求1所述的工程化免疫细胞的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有容器，以及位于容器内的：

(1)第一核酸序列，所述第一核酸序列含有用于表达权利要求1中所述CAR的第一表达盒，其中所述CAR的抗原结合结构域为NKG2D的胞外结构域，其中，所述NKG2D的胞外结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第73-216位所示；和

(2)第二核酸序列，所述第二核酸序列含有用于联合表达CCR2b的第二表达盒。