[发明专利]一种金钱鱼脑细胞的体外培养方法

权利要求书

1.一种金钱鱼脑细胞的体外培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.原代培养：取健康金钱鱼，消毒后，取出脑组织于漂洗培养液中浸泡除菌，反复漂洗后吸去培养液加入胰酶，切碎，再加胰酶于室温下消化，将消化后的细胞过滤，取滤液，1400～1600rpm离心8～12min，去上清，用原代细胞培养液重悬沉淀，移入培养瓶中，25～30℃培养，每2～4天按半量换液方式更换培养液；所述漂洗培养液为添加有350～450IU/mL青霉素、350～450μg/mL链霉素、450～550μg/mL制霉菌素及2.66g/mL氯化钠的L15培养基；所述原代细胞培养液为添加有350～450IU/mL青霉素、350～450μg/mL链霉素、450～550μg/mL制霉菌素、2.66g/mL氯化钠和10～20％FBS的L15培养基；

S2.传代培养：原代细胞生长至铺满单层后，用胰酶在室温下消化，加入原代细胞培养液吹下贴壁细胞，将细胞悬液接种于培养瓶中进行传代培养。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述漂洗培养液为添加有400IU/mL青霉素、400μg/mL链霉素、500μg/mL制霉菌素及2.66g/mL氯化钠的L15培养基。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述原代细胞培养液为添加有400IU/mL青霉素、400μg/mL链霉素、500μg/mL制霉菌素、2.66g/mL氯化钠和20％FBS的L15培养基。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤S1中吸去培养液后加入1mL0.25％胰酶，切碎，再加1mL 0.25％胰酶室温消化至少30min。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤S1中将培养瓶置于28℃培养箱内培养，每2～4天按半量换液方式更换培养液。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤S2中用0.25％胰酶在室温下消化2～3min。

7.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤S2中当细胞传至第5代时，将原代细胞培养液中FBS浓度降低到15％，抗生素浓度调整至200IU/mL青霉素、200μg/mL链霉素、250μg/mL制霉菌素。

8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，步骤S2中当细胞传至第7代时，将原代生长培养液中FBS浓度降低到10％，抗生素浓度调整至100IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素、125μg/m制霉菌素。

9.权利要求1～8任一所述方法培养获得的金钱鱼脑细胞系。

10.权利要求9所述金钱鱼脑细胞系在金钱鱼基因功能和金钱鱼病毒病研究中的应用。