[发明专利]一种针对Cry3Bb蛋白的纳米抗体及其制备和用途

说明书

本发明公开了一种针对Cry3Bb蛋白的纳米抗体及其制备和用途，包括所述的纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明制备的纳米抗体可替代传统抗体，应用于Cry3Bb蛋白的免疫学检测分析，该纳米抗体具有制备简单、成本低、结合活性高等特点。

技术领域

本发明属于基因工程抗体和食品生物技术领域，尤其是涉及一种针对Cry3Bb蛋白的纳米抗体及其制备和用途。

背景技术

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)在形成孢子阶段会产生一种伴胞晶体蛋白，对鳞翅目、鞘翅目等多种昆虫具有高效毒杀作用，被称为Bt蛋白或δ-内毒素。目前已知的Bt蛋白超过400种，根据氨基酸序列同源性，分为晶体蛋白(crystal protein,Cry)和细胞溶解蛋白(cytolytic protein,Cyt)两大类。其中，Cry蛋白被广泛应用于转基因农作物的害虫防治中，常见的种类包括Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1C、Cry2A和Cry3Bb等。近年来，转基因农作物的种植面积呈快速增长趋势，但转基因农作物的安全性并未得到广泛认同，转基因农作物可能对生态环境和人体健康造成潜在危害。为安全起见，许多国家已经对转基因产品实行了标签制度。因此，对转基因农作物及其产品中的Bt Cry蛋白进行有效监控和快速检测是十分必要的。

Bt Cry蛋白的检测方法主要是基于核酸和蛋白质水平的分析，包括PCR方法和ELISA方法。PCR方法具有灵敏度高、准确性高等特点，但不能对表达的Bt Cry蛋白进行定量检测，且需要专业的仪器设备和操作人员。而ELISA方法具有简便、快速、低耗等特点，适合于农作物中Cry蛋白的现场快速定性和定量检测。其中，高特异性、高亲和性抗体的制备是ELISA方法建立的前提和关键。

纳米抗体(Nanobody)源于驼科动物(骆驼、羊驼等)体内天然缺失轻链的重链抗体，克隆重链抗体的可变区得到只由一个重链可变区组成的单域抗体，称为单域重链抗体，也称为纳米抗体。纳米抗体是目前已知最小的功能性抗体片段，只含有3个互补决定区(Complementarity-determining region,CDR)，却具有与普通抗体相同的抗体功能。与普通抗体相比，纳米抗体的CDR3更长，可以形成凸环结构，能够伸入目标蛋白的凹槽、裂缝等普通抗体难以达到的表位。同时，纳米抗体还具有高亲和力、高水溶性、易表达等特点。因此，纳米抗体是一种优良的抗体材料，可替代传统抗体，广泛应用于医疗诊断、食品安全检测等多个领域。然而，目前，针对Cry3Bb蛋白的纳米抗体还未见报道。因此，迫切需要开发有效的针对Cry3Bb蛋白的纳米抗体。

发明内容

本发明为了克服现有技术的不足，提供一种针对Cry3Bb蛋白的纳米抗体及其制备和用途。

为了实现上述目的，本发明的第一方面，提供了一种针对Cry3Bb蛋白的纳米抗体，所述的纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

优选的，所述纳米抗体包含框架区及互补决定区，其中框架区包括以下4段FR的氨基酸序列：SEQ ID NO.2所示的FR1、SEQ ID NO.4所示的FR2、SEQ ID NO.6所示的FR3及SEQID NO.8所示的FR4；所述互补决定区包括以下3段CDR的氨基酸序列：SEQ ID NO.3所示的CDR1、SEQ ID NO.5所示的CDR2及SEQ ID NO.7所表示的CDR3。互补决定区主要负责抗原的识别，框架区结构相对稳定，主要起着支撑维持蛋白质结构的作用。

本发明的第二方面，提供了一种编码如上述针对Cry3Bb蛋白的纳米抗体的核苷酸，其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。

本发明的第三方面，提供了一种重组表达载体，包含如权利要求3所述的核苷酸。

本发明的第四方面，提供了一种重组工程菌，包含如权利要求4所述的重组表达载体。

本发明的第五方面，提供了一种如上述针对Cry3Bb蛋白的纳米抗体在Cry3Bb免疫学检测分析中的应用。